全反式維甲酸誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞粒系分化中miRNA-26的表達(dá)變化.pdf

1、研究背景：急性髓系白血病(AML)是一組臨床和生物學(xué)行為存在高度異質(zhì)性的疾病。AML的發(fā)生是由髓系白細(xì)胞增殖失控、分化障礙和凋亡抑制所致，這其中涉及一系列基因的改變，如染色體易位、重排、點(diǎn)突變、缺失、基因修飾如甲基化等，導(dǎo)致癌基因的激活和抑癌基因的失活。近年來(lái)，隨著人們對(duì)表觀遺傳學(xué)認(rèn)識(shí)的深入，尤其是去甲基化藥物阿扎胞苷(azacitidine)及其脫氧衍生物5-氮雜2′-脫氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine)在治療腫瘤

2、患者的成功臨床應(yīng)用，表觀遺傳學(xué)逐漸成為腫瘤研究的熱點(diǎn)。
　　 MicroRNA(miRNA)是生物體內(nèi)源長(zhǎng)度約為18-25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA，通過(guò)表觀遺傳的方式調(diào)控生物體的正常生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老、死亡，以及疾病的病理過(guò)程。作為一個(gè)廣泛存在的可對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行微調(diào)的分子，其在急性髓系白細(xì)胞增殖和分化中的意義近年來(lái)開(kāi)始受到關(guān)注。誘導(dǎo)白血病細(xì)胞重新分化是白血病治療的主要策略之一，使用全反式維甲酸(all-trans retinoic

3、 acid,ATRA)能使70-80％以上的急性早幼粒細(xì)胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者得到完全緩解，而聯(lián)合化療可獲得長(zhǎng)期緩解，甚至有可能治愈。而miRNAs參與APL細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)制還未完全闡明，尤其是對(duì)于PML-RARα融合基因陰性的急性髓系白血病細(xì)胞。因此，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(real-time fluorescence quantitative polyme

4、rase chain reaction,real-time PCR)對(duì)miR-26在ATRA誘導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞HL-60粒系分化中的表達(dá)進(jìn)行研究，為了解miR-26在分化調(diào)控過(guò)程中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 目的：探討全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化對(duì)miR-26表達(dá)的影響。
　　 方法：以全反式維甲酸(1μM)影響下不同時(shí)間的HL-60細(xì)胞為檢測(cè)對(duì)象，采用顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞儀檢測(cè)

5、細(xì)胞表面分化標(biāo)志CD15；Rea1-time PCR檢測(cè)不同時(shí)段miR-26的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：1)隨著藥物誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，被誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞向粒系分化，并出現(xiàn)細(xì)胞核形的改變；2)與對(duì)照組相比，ATRA作用3d、4d、5d和6d后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)HL-60細(xì)胞的分化率分別(52.39±3.56)％、(77.65±0.24)％、(83.90±1.30)％、(68.13±1.67)％,(P＜0.01)；3)Real-tim