HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)分化后LMP-TAP的表達變化及其意義的研究.pdf

1、背景：腫瘤的免疫逃逸機制是目前腫瘤分子生物學(xué)研究的一個熱點，已發(fā)現(xiàn)多種來源的腫瘤細(xì)胞不表達或低水平表達HLA-I類分子，從而逃脫機體的免疫監(jiān)視。低分子量蛋白酶體(LMP)包括兩個亞基LM2、LMP7，其作用在于能夠水解腫瘤抗原成為合適的肽段?？乖幚硐嚓P(guān)轉(zhuǎn)運體蛋白（TAP）由TAP1和TAP2組成，主要負(fù)責(zé)將胞漿內(nèi)經(jīng)蛋白酶體降解后產(chǎn)生的肽段轉(zhuǎn)運到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中。這些肽段在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔(ER)中與MHC-I類分子連接然后在細(xì)胞表面表達提呈，為CD

2、8+T淋巴細(xì)胞所識別，從而引起特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)(CTL)。TAP1、TAP2、LMP2和LMP7其中一個或兩個亞基的缺失都會導(dǎo)致MHC-I類分子細(xì)胞表面表達的急劇下降。在LMP/TAP基因與腫瘤的關(guān)聯(lián)研究中，許多學(xué)者對實體瘤LMP/TAP表達失衡與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移、存活相關(guān)性的研究進行了較為廣泛的探討，比如結(jié)腸癌、肺癌、腎細(xì)胞癌、食管癌、乳腺癌、原發(fā)性黑色素瘤等細(xì)胞系。這一系列研究揭示，這些細(xì)胞系的TAP或者LMP均有

3、不同亞類及不同程度的表達缺陷，但LMP/TAP與血液系統(tǒng)惡性疾病相關(guān)性分析則偶有報導(dǎo)。
　　 目的：基于上述理論背景，本研究建立ATRA和PMA分別誘導(dǎo)急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞分化的模型，對LMP/TAP構(gòu)成亞單位TAP1、TAP2、LMP2、LMP7在該細(xì)胞模型中的表達變化及其臨床意義進行初步探討，旨在了解LMP/TAP在急性白血病發(fā)病和預(yù)后中的作用，探索新的基因靶點，擬為白血病的免治療開辟新的治療道路。
　

4、　 方法：取對數(shù)生長期的HL-60細(xì)胞，分別加入ATRA、PMA進行誘導(dǎo)分化，同時設(shè)有陰性對照組，于37℃、5％ CO2飽和濕度下培養(yǎng)72小時，Wright-Gimesa染色觀察HL-60細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)檢測CD11b、CD14的表達，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測TAP1、TAP2、LMP2、LMP7基因的mRNA的表達，蛋白質(zhì)印記(Western blot)檢測細(xì)胞TAP2的蛋白表達。測定結(jié)果用(x)±s表示，均數(shù)比

5、較采用f檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)果：0.8μM ATRA和50nM PMA分別作用HL-60細(xì)胞72小時后可顯著抑制細(xì)胞增殖，并出現(xiàn)明顯的分化現(xiàn)象，倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞分別向成熟粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞方向分化。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)記:實驗組的CD11b、CD14與對照組相比均有明顯升高(P＜0.05)。RT-PCR檢測誘導(dǎo)分化模型:TAP1、TAP2、LMP2、LMP7基因mRNA表達水平有顯著升高(P＜0