低氧對(duì)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞腺苷受體表達(dá)的影響及芍藥苷的干預(yù)作用.pdf

1、目的:
　　 1.研究低氧對(duì)離體培養(yǎng)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary artery smoothmuscle cells,PASMCs)腺苷受體(adenosine receptor,AR)表達(dá)的影響。
　　 2.研究芍藥苷(paeoniflorin,PF)對(duì)低氧大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 采用酶消化法與組織塊種植法相結(jié)合獲取大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,使用細(xì)胞免

2、疫化學(xué)染色法和免疫熒光染色法鑒定、0.4％臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力。采用CCK-8染色法測(cè)定常氧和低氧狀態(tài)下肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的活性,及不同濃度芍藥苷(0.02μmol/L、0.21μmol/L、2μmol/L、20μmol/L)對(duì)低氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞活性的影響,以選擇合適濃度；以檢測(cè)的吸光度(Absorbance,A)值大小作為細(xì)胞相對(duì)數(shù)量的比較。離體培養(yǎng)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分組如下:分別為正常對(duì)照組(N)、低氧組(H)、低氧+芍藥苷(PF

3、)、低氧+選擇性AmAR拮抗劑MRS1754(MRS)。采用流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞周期、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time RT PCR)檢測(cè)細(xì)胞腺苷受體mRNA表達(dá)、Western-Blot檢測(cè)A2BAR蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞腺苷受體mRNA表達(dá),結(jié)果顯示,低氧使肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞A2BAR表達(dá)量升高,與正常對(duì)照組比較具有顯著差異(P<0.05),而其他腺苷受體(A

4、1AR、A2AAR和A3AR)與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　 2.選擇性A2BAR拮抗劑MRS1754干預(yù)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,CCK-8檢測(cè)其A值與低氧組比較明顯升高,具有顯著性差異(P<0.05)。
　　 3.在低氧狀態(tài)下,肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞CCK-8檢測(cè)的A值升高,與正常組比較有顯著差異(P<0.01)。芍藥苷干預(yù)使低氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞A值下降,隨著芍藥苷濃度的增加,A值呈濃度依賴性下降；當(dāng)芍藥苷濃度

5、為20μmol/L時(shí),對(duì)細(xì)胞活性的抑制率最為明顯,A值接近于正常組值。
　　 4.細(xì)胞周期檢測(cè)顯示,在正常狀態(tài)下,離體培養(yǎng)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞周期中S期的比例為(27.10±0.15)％；在低氧狀態(tài)下,大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞周期中S期所占比例明顯增加(32.37±0.80)％,與正常組比較有顯著差異(P<0.05)；給予芍藥苷干預(yù),S期比例與低氧組比較明顯降低(27.06±0.24)％,可恢復(fù)至正常組水平。
　　 5.在

6、低氧狀態(tài)下,加芍藥苷組肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞.A2BAR表達(dá)明顯增加,與低氧組比較有顯著性差異(P<0.05),而其他腺苷受體(A1AR、A2AAR和A3AR)無(wú)顯著變化(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.低氧條件下肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞A2BAR表達(dá)量顯著升高,A1AR、A2AAR和A3AR無(wú)顯著變化；A2BAR具有抑制低氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖作用。
　　 2.芍藥苷能抑制低氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖,其上調(diào)低氧肺動(dòng)脈