低氧對肺動脈平滑肌細(xì)胞腺苷A2b受體表達(dá)的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、[目的]
　　本研究擬通過培養(yǎng)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)，檢測低氧下PASMCs腺苷A2bAR和PCNA mRNA表達(dá)情況，研究低氧對腺苷A2bAR的影響，運(yùn)用PI3K特異性抑制劑LY294002處理細(xì)胞，探討HIMF/PI3K/Akt通路對低氧誘導(dǎo)A2bAR表達(dá)的作用。
　　[方法]
　　1.采用組織塊貼壁法原代培養(yǎng)PASMCs，免疫熒光法鑒定細(xì)胞;用真空壓縮袋制作常壓低氧培養(yǎng)細(xì)胞的模擬模型裝置（氧濃度為2

2、％），通過檢測細(xì)胞增殖來驗(yàn)證該設(shè)計(jì)的可行性。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組:設(shè)實(shí)驗(yàn)組[即低氧組(Hypoxia，H組)]和對照組[即常氧組(Normal,N組)]，每組均設(shè)時間點(diǎn)為6h、24h、48h、72h。
　　3.用流式細(xì)胞術(shù)檢測低氧6h、24h、48h、72h PASMCs增殖情況。
　　4.應(yīng)用qRT-PCR法檢測常氧和低氧6h、24h、48h、72h PASMCs A2bAR和PCNA mRNA的表達(dá)情況。
　　

3、5.采用免疫熒光的方法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察PI3K特異性抑制劑LY294002在1umol/L、10umol/L、25umol/L、50umol/L濃度下對A2bAR在PASMCs上的表達(dá)影響。
　　[結(jié)果]
　　1.流式細(xì)胞術(shù)檢測PASMCs增殖結(jié)果顯示，培養(yǎng)6h、24h、48h、72h后常氧組和低氧組的PASMCs增殖差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.qRT-PCR法檢測常氧和低氧組A2bAR和P

4、CNA mRNA表達(dá)顯示，常氧組A2bAR和PCNA mRNA表達(dá)均呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(F=200.170，P＜0.05;F=56.271，P＜0.05)，而低氧組呈現(xiàn)先上升再下降后上升趨勢(F=102.729，P＜0.05;F=172.038，P＜0.05)。
　　3.激光共聚焦顯微鏡下觀察到隨著LY294002濃度的增加，常氧下A2bAR的熒光表達(dá)強(qiáng)度有逐漸下降趨勢，但趨勢極小，而低氧下A2bAR的熒光表達(dá)強(qiáng)度則有明顯下降趨