
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文檔簡(jiǎn)介
1、[目的]
本研究是通過(guò)慢性低氧肺動(dòng)脈高壓大鼠模型,研究慢性低氧對(duì)大鼠肺動(dòng)脈血管壁腺苷A2B受體(A2BR)的分布、含量和基因表達(dá)的影響,以期為臨床應(yīng)用腺苷或受體激動(dòng)劑治療肺動(dòng)脈高壓提供理論依據(jù)。
[方法]
1.建立常壓低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型。
2.實(shí)驗(yàn)分組:48只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組(常氧組)、低氧1天組、低氧3天組、低氧5天組、低氧7天組、低氧10
2、天組、低氧14組、低氧21天組,每組6只。
3.用右心導(dǎo)管法測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)。
4.用免疫組織化學(xué)方法觀察腺苷A2BR蛋白表達(dá)的分布和含量的變化。
5.用熒光原位雜交法檢測(cè)肺動(dòng)脈壁上腺苷A2B受體mRNA(A2BRmRNA)的分布和表達(dá)水平。
6.用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)肺動(dòng)脈血管壁腺苷A2BR基因表達(dá)水平。
[結(jié)果]
1.肺動(dòng)脈平均壓在
3、低氧第五天既明顯增高,較對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.免疫組化結(jié)果顯示,慢性低氧導(dǎo)致腺苷A2BR蛋白在大鼠肺動(dòng)脈血管壁平滑肌細(xì)胞膜和血管內(nèi)膜中表達(dá)增加,隨著低氧時(shí)間延長(zhǎng),逐漸增加,低氧5天組以上(含5天組)相對(duì)于對(duì)照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),而在常氧組及3天以下組極少表達(dá)。
3.熒光原位雜交試驗(yàn)結(jié)果顯示,腺苷A2BRmRNA表達(dá)在正常大鼠肺動(dòng)脈血管壁平滑肌細(xì)胞膜和血管內(nèi)膜中較少表達(dá),
4、低氧導(dǎo)致表達(dá)增高,從低氧第3天起開(kāi)始增加,至低氧第5天時(shí)相對(duì)于對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),隨著低氧時(shí)間延長(zhǎng),逐漸增加,較對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.001)。
4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:細(xì)胞中腺苷A2BR基因表達(dá)從低氧第3天開(kāi)始增加,在低氧第5天后明顯增高(均P<0.001),并隨著低氧時(shí)間的延長(zhǎng),表達(dá)逐漸升高。
[結(jié)論]
1.腺苷A2BRmRNA和蛋白在正常大鼠肺動(dòng)
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