腺苷A2A受體對不同年齡小鼠肺動脈結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、目的:觀察不同年齡組腺苷A2A受體基因敲除小鼠肺動脈結(jié)構(gòu)的變化，探討年齡因素對腺苷A2A受體基因敲除小鼠肺血管重建的影響及可能的機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)設(shè)定三個(gè)年齡組:A組即6-8周組，B組即30-40周組和C組即80-120周組，每個(gè)年齡組分為敲除組（A-/-，B-/-，C-/-）和野生組(A+/+，B+/+，C+/+)，共6組，每組6只雄性小鼠。在SPF級動物房飼養(yǎng)到相應(yīng)年齡段后，用10％水合氯醛(0.1ml/10g)腹腔注射麻

2、醉，取腹腔靜脈血，處死動物取心肌，分離右心室(RV)和左心室加室間隔(left ventricle+septum，LV+S)，并用濾紙吸干血液，稱量分離后的兩部分心臟重量，計(jì)算右心室肥厚指數(shù)RV/(LV+S)。使用分光光度計(jì)測定血漿H2S的水平;肺組織切片采用蘇木精一伊紅（HE）染色，Weigert彈力染色觀察肺組織病理學(xué)變化、肺血管重建和彈力纖維的變化;Image-proplus(IPP)圖像分析技術(shù)測定小鼠肺小動脈管壁厚度指標(biāo)(管壁

3、厚度占外徑的百分比(WT％)和管壁面積占總面積的百分比(WA％)); RT-PCR法測肺組織低氧誘導(dǎo)因子-1α（Hypoxia induce factor-1α，HIF-1α），血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)的表達(dá);免疫組化染色法定性觀察小鼠肺小動脈管壁HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)變化。
　

4、　結(jié)果:
　　1.RV/(LV+S):B-/-組較B+/+組，C-/-組較C+/+組RV/(LV+S)比值增高（P＜0.05）;A-/-組與A+/+組比較RV/(LV+S)比值無明顯變化(P＞0.05);C-/-組較B-/-、A-/-組RV/(LV+S)比值增高(P＜0.05); B-/-組較A-/-組RV/(LV+S)比值增高(P＜0.05)。
　　2.WA％，WT％:B-/-組較B+/+組，C-/-組較C+/+組WA％，

5、WT％的值增高（P＜0.05）;A-/-組與A+/+組比較WA％，WT％的值無明顯變化(P＞0.05);C-/-組較B-/-、A-/-組WA％，WT％的值增高(P＜0.05);B-/-組較A-/-組WA％，WT％的值增高(P＜0.05)。
　　3.血漿硫化氫:B-/-組較B+/+組，C-/-組較C+/+組血漿硫化氫水平降低（P＜0.05);A-/-組與A+/+組比較血漿硫化氫水平無明顯變化(P＞0.05);C-/-組較B-/-、A

6、-/-組血漿硫化氫水平降低(P＜0.05);B-/-組較A-/-組血漿硫化氫水平降低(P＜0.05)。
　　4.HIF-1α mRNA，VEGFmRNA and CSEmRNA: B-/-組較B+/+組，C-/-組較C+/+組，肺組織HIF-1α mRNA和VEGFmRNA表達(dá)增高(P＜0.05)，CSEmRNA表達(dá)降低(P＜0.05);A-/-組與A+/+組比較肺組織HIF-1α mRNA，VEGFmRNA和CSEmRNA表達(dá)無

7、明顯差異(P＞0.05);C-/-組較B-/-、A-/-組肺組織HIF-1α mRNA和VEGFmRNA表達(dá)增高(P＜0.05)，CSEmRNA表達(dá)降低(P＜0.05);B-/-組較A-/-組肺組織HIF-1α mRNA和VEGFmRNA表達(dá)增高（P＜0.05），CSEmRNA表達(dá)降(P＜0.05)。
　　5.HIF-1α蛋白:HIF-1α蛋白在野生組小鼠的肺血管中幾乎無表達(dá);HIF-1α蛋白在A-/-組肺血管表達(dá)甚少，在B-/-

8、組和C-/-組肺血管表達(dá)漸增多。
　　6.VEGF蛋白:隨著周齡增加，敲除組肺小血管VEGF蛋白表達(dá)漸增多，野生組無明顯變化，B-/-組較B+/+組，C-/-組較C+/+組比較，肺小血管VEGF蛋白表達(dá)增多。
　　結(jié)論:
　　1.腺苷A2A受體基因敲除小鼠存在肺血管重建及右心室肥厚現(xiàn)象，提示在生理情況下，腺苷A2A受體對維持正常肺動脈結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定肺動脈壓具有重要作用。
　　2.隨著年齡增加，腺苷A2A受體基因敲除小