不同年齡組腺苷A2A受體基因敲除小鼠肺動(dòng)脈結(jié)構(gòu)變化的研究.pdf

1、目的:觀察不同年齡組腺苷A2A受體敲除小鼠肺小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)的變化，探討肺小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)變化的機(jī)制，為尋找治療肺動(dòng)脈高壓提供理論依據(jù)。
　　方法:實(shí)驗(yàn)為三個(gè)年齡組（6-8周齡、30-40周齡、80-120周齡），各年齡組為腺苷A2A受體基因敲除組(Knockout，KO)6只、野生組(Wild-type，WT)6只。10％水合氯醛腹腔注射麻醉(0.1ml/10g);溫生理鹽水灌注，處死動(dòng)物取出肺臟，分離，沿右心室邊緣切開分離出右心室（Rig

2、ht ventricle,RV）與左心室加室間隔(Left ventricle+Septum，LV+S)，并用濾紙吸干水分，稱重，計(jì)算右心室肥厚指數(shù)(Right Ventricular Hypertrophy Index，RVHI[RV/(LV+S)]。右上肺葉中部組織切片采用蘇木精-伊紅(HE，Hematoxylin-eosin)染色、Weigert彈力染色法染色觀察肺組織病理學(xué)變化、肺血管重建和彈力纖維的變化，經(jīng)Image-prop

3、lus6.0(IPP)圖像分析技術(shù)（美國Media Cybernetics公司）測量并計(jì)算小鼠肺小動(dòng)脈管壁厚度及面積[管壁厚度占外徑的百分比（WT％）和管壁面積占總面積的百分比(WA％)];逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR)法測肺組織內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial Nitric OxideSynthase，eNOS)、小窩蛋白-1（

4、Caveolin-1，Cav-1）和血紅素氧化酶-1(HemeOxygenase-1，HO-1) mRNA的表達(dá)，進(jìn)行半定量分析;用免疫組化染色法定性檢測各組小鼠肺小動(dòng)脈管壁eNOS、Cav-1和HO-1的蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.右心室肥厚指數(shù)RVHI[RV/(LV+S)）:敲除組30-40W、80-120W右心肥厚指數(shù)均高于各自的野生組（p＜0.05）;周齡6-8W右心肥厚指數(shù)敲除組與野生組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.0

5、5)。周齡30-40W敲除組右心肥厚指數(shù)高于6-8W敲除組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，周齡80-120W敲除組右心肥厚指數(shù)高于30-40W、6-8W敲除組(p＜0.05)。
　　2.IPP圖像采集分析系統(tǒng)測量與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:敲除組30-40W、80-120W的WA％、WT％均高于各自的野生組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);周齡6-8W WA％、WT％敲除組與野生組比較無變化(p＞0.05)。周齡30-40W敲除組WA

6、％、WT％高于6-8W敲除組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);周齡80-120w敲除組WA％、WT％高于30-40W、6-8W敲除組(p＜0.05)。
　　3.各組間eNOSmRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　4.肺組織Cav-1mRNA:敲除組30-40W、80-120W肺組織Cav-1 mRNA表達(dá)與各自的野生組比較均增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。周齡6-8W敲除組肺組織Cav-1mRNA

7、表達(dá)與同年齡段野生組比較無變化(p＞0.05)。周齡30-40W敲除組肺組織Cav-1mRNA表達(dá)高于6-8W敲除組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);周齡80-120W敲除組肺組織Cav-1mRNA表達(dá)高于30-40W、6-8W敲除組(p＜0.05)。
　　5.肺組織HO-1mRNA:敲除組周齡30-40W、80-120W肺組織HO-1mRNA表達(dá)與各自的野生組比較均增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。周齡6-8W敲除組

8、肺組織HO-1 mRNA表達(dá)與同年齡段野生組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。周齡30-40W敲除組肺組織HO-1mRNA表達(dá)高于6-8W敲除組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);周齡80-120W敲除組肺組織HO-1mRNA表達(dá)高于30-40W、6-8W敲除組（p＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.腺苷A2A受體基因敲除后可以引起肺小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)重建及右心室肥厚;提示生理情況下，腺苷A2A受體對于維持肺動(dòng)脈結(jié)構(gòu)完整、肺

9、動(dòng)脈壓的穩(wěn)定具有重要作用。
　　2.隨小鼠周齡增加，腺苷A2A受體基因敲除后引起肺小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)重建及右心室肥厚的現(xiàn)象越來越明顯。
　　3.腺苷A2A受體基因敲除后引起肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Cav-1表達(dá)上調(diào);提示生理情況下，腺苷A2A受體可能抑制Cav-1表達(dá)，調(diào)節(jié)NO(Nitric Oxide)濃度，從而維持肺小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)完整性和肺動(dòng)脈壓的穩(wěn)定。
　　4.腺苷A2A受體基因敲除后下調(diào)肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞HO-1表達(dá);提示生理情況下