痤瘡的流行病調查及中醫(yī)分型和積雪甙對造模大鼠炎癥結節(jié)作用機理探討.pdf

1、本課題主要包括兩個方面的內容：1痤瘡的流行病調查及中醫(yī)分型；2積雪甙對造模大鼠局部炎癥結節(jié)的作用機理。 第一部分：痤瘡的流行病調查及中醫(yī)分型 目的： 本課題主要通過流行病調查研究的方法，探討?zhàn)畀彽闹嗅t(yī)分型以及誘導或加重痤瘡的危險因素，進一步了解中國痤瘡流行病發(fā)展趨勢，為指導臨床治療提供理論幫助。 研究方法： 本課題采用流行病學方法，設計統(tǒng)一的流行病調查表，收集武漢市第一醫(yī)院每周痤瘡?？崎T診的痤瘡患

2、者的資料，采用醫(yī)學統(tǒng)計方法對調查對象的性別、年齡、皮膚類型、精神狀態(tài)、睡眠時間、女性月經(jīng)與痤瘡的關系以及中醫(yī)辨證分型進行統(tǒng)計學分析，最后得出結論。 結果： 1.2558例痤瘡患者中，女性1748例，男性810例，就診患者中以女性多見，發(fā)病年齡以青春期為主，男性發(fā)病年齡集中在15-20歲的年齡段，女性患者的發(fā)病年齡集中在小于15歲的年齡段。 2.油性皮膚的痤瘡患者最為多見所占比例最大，其次為中性皮膚、混合性皮膚、干

3、性皮膚。 3.2558例痤瘡患者中，精神緊張的痤瘡患者1619例，占63.29％，認為與痤瘡發(fā)病相關的占30.70％；無精神緊張的患者939例，占36.71％。 4、經(jīng)常熬夜的患者所占比例為21.85％，偶爾熬夜的患者占42.65％，認為與痤瘡發(fā)病相關的占49.27％；不熬夜的患者所占比例為35.50％。 5.2558例痤瘡患者中，痰瘀結聚型最多，占37.57％，其后依次為肝氣郁結型，占28.03％，濕熱蘊結型占

4、26.94％，肝腎陰虛型占6.53％，肺經(jīng)風熱型占0.67％。男性痤瘡以痰瘀結聚型最為多見，青春期后女性患者以肝氣郁結型最為多見，青春期女性患者證型分布無明顯差別。 6.女性痤瘡患者中，痤瘡加重與月經(jīng)有關的為1103例，主要為月經(jīng)前痤瘡加重，占56.18％，其次為經(jīng)中加重，經(jīng)后加重。肝腎陰虛型與月經(jīng)的關系最密切。 結論： 1.2558例就診痤瘡患者中以青春期女性患者多見，發(fā)病年齡女性早于男性。 2.油性皮

5、膚、精神緊張、熬夜可能為誘發(fā)或加重痤瘡的危險因素，女性患者多在月經(jīng)前痤瘡加重。 3.我科痤瘡門診的患者中，男性以痰瘀結聚型最為多見，青春期后女性患者以肝氣郁結型最為多見，青春期女性患者證型分布無明顯差別。 第二部分：積雪甙對造模大鼠局部炎癥結節(jié)的作用機理的探討 目的： 本研究擬從動物模型中，探討積雪甙對炎癥后成纖維細胞作用機理，通過對光鏡和電鏡的觀察，了解在炎癥發(fā)展過程中成纖維細胞的超微結構的改變，為積雪

6、甙在臨床廣泛應用提供理論基礎。 實驗方法： 1.預實驗： 1.1分別用單純的痤瘡丙酸桿菌、不完全福氏佐劑、痤瘡丙酸桿菌+不完全福氏佐劑造模。在造模后不給予藥物干預，觀察造模后各組大鼠局部組織的改變，并通過光鏡觀察不同時期的病理改變，從而確定炎癥反應高峰期，成纖維細胞、膠原纖維在不同時期的改變情況以及三組模型中最佳的動物模型。 1.2瘡丙酸桿菌培養(yǎng)：凍干痤瘡丙酸桿菌以腦心浸液復蘇后，室溫下放置數(shù)分鐘，取少許

7、溶液于哥倫比亞血平板，厭氧環(huán)境下35-37℃培養(yǎng)48-72小時，調整痤瘡丙酸桿菌濃度為2×1010/ml備用。并經(jīng)鏡下檢驗觀察為藍色棒狀痤瘡丙酸桿菌。 1.3造模：大鼠背部皮膚備皮，約1×1cm大小，每只大鼠四處。痤瘡丙酸桿菌組將調整好濃度的痤瘡丙酸桿菌接種到大鼠皮下，每處0.1ml，約2000萬單位的細菌；不完全福氏佐劑組，將不完全福氏佐劑與生理鹽水以3：7的比例乳化后接種到大鼠皮下，每處0.1ml；痤瘡丙酸桿菌+不完全福氏佐

8、劑，將不完全福氏佐劑與痤瘡丙酸桿菌以3：7的比例乳化后接種到大鼠皮下，每處0.1ml，約2000萬單位的細菌。 2.實驗 2.1痤瘡丙酸桿菌培養(yǎng)：同前2.2造模：大鼠背部皮膚備皮，約1×1cm大小，每只大鼠四處。將調整好濃度的痤瘡丙酸桿菌與不完全福氏佐劑以7：3的比例乳化后接種到大鼠皮下，每處0.1ml，約2000萬單位的細菌。 2.3分組：將四十只大鼠隨機分為四組，積雪甙和阿奇霉素組、積雪甙組、阿奇霉素組、空白

9、對照組，每組十只。 2.4灌胃：于造模后第二天開始灌胃，每只大鼠灌2ml，藥物濃度分別為：積雪甙和阿奇霉素組，積雪甙濃度為1.5mg/ml，阿奇霉素濃度為10.42mg/ml；積雪甙組，積雪甙濃度為0.75mg/ml；阿奇霉素組，阿奇霉素濃度為5.21mg/ml；空白對照組，0.9％生理鹽水。(《實驗動物學》湖北科學技術出版社) 2.5光鏡標本制作及觀察：于造模后第20、30天切除大鼠造模組織，10％甲醛固定，按石蠟切片

10、常規(guī)處理，用腿染色，在光鏡下觀察。 2.6電鏡標本制作及觀察：在造模后第20、30天切除大鼠皮膚，2.5％戊二醛前固定，1％鋨酸固定，梯度乙醇脫水，樹脂包埋，半薄切片定位，LKB2V型超薄切片機切片，日立H2600型透射電鏡觀察，觀察接種部位成纖維細胞內細胞器結構的變化。 結果: 1.預實驗結果：三組模型比較發(fā)現(xiàn)，以痤瘡丙酸桿菌+不完全福氏佐劑的炎癥反應、成纖維細胞、膠原纖維的改變最為明顯。不同時期的病理改變顯示

11、，造模后第10天炎癥反應最劇烈；第20天成纖維細胞增殖，膠原纖維增多，排列致密最明顯；第30天各組炎癥反應較輕甚至消失，但仍有成纖維細胞的增殖和膠原纖維增多增粗，較20天有減輕。 2.實驗結果 2.1光鏡結果：空白組膠原增生、增粗明顯，排列致密，30天較20天的改變不明顯。阿奇霉素組膠原改變較空白組稍輕，但同組前后比較改善不明顯，有積雪甙干預的膠原改變較空白組明顯要輕，同組前后對比，亦有明顯改善。 2.2電鏡結果

12、：空白對照組成纖維細胞增殖，凋亡，細胞體積變大，成纖維細胞體積增大，胞漿內線粒體數(shù)目較多，腫脹，粗面內質網(wǎng)擴張明顯，部分細胞核內異染色質明顯增多。阿奇霉素組成纖維細胞的胞漿改變較空白組輕。經(jīng)積雪甙干預的成纖維細胞胞漿改變較空白組明顯要輕，第30天時，成纖維細胞胞漿改變接近正常。 結論: 積雪甙通過抑制成纖維細胞過于活躍的生物學活性從而使其分泌膠原的功能下降，進而起到抑制膠原增生的作用，減少了造模大鼠炎癥結節(jié)愈后留下纖維性