基于色譜-質譜聯(lián)用的知母總皂苷抗阿爾茨海默癥的藥效篩選研究.pdf

1、中藥是中華醫(yī)藥學的寶貴財富，對其進行系統(tǒng)的研究對于繼承和發(fā)展中藥，并得到全世界的認同，具有非常顯著的意義。盡管在中國已經應用了幾千年歷史，但當前中藥還難以走向世界，得到國際藥學同行認可，主要原因包括:(1)物質基礎不明確;(2)作用機制不清楚;(3)缺乏有效手段來評價中藥療效及傳統(tǒng)中醫(yī)理論的正確性。
　　 知母甾體皂苷具有良好的預防中樞神經系統(tǒng)疾病的療效，但是其復雜的化學成分和生物利用度，特別是能夠透過血腦屏障的皂苷成分及其代謝

2、產物相關研究的大大阻礙了其用于大腦神經功能紊亂治療藥物的進展。本論文綜合了多維色譜質譜聯(lián)用，微透析采樣，代謝組學及模式識別處理技術等藥物分析學科前沿的手段和方法，系統(tǒng)開展了知母總皂苷成分，藥效機理與阿爾茨海默癥致病機制的全面研究，并為其它中藥-疾病這種典型的“系統(tǒng)對系統(tǒng)”的研究模式提供參考。
　　 1.發(fā)展了一種新的全二維液相色譜-質譜聯(lián)用技術，以反相色譜(RPLC)用作第一相分離，聚胺色譜(polyamineⅡ)用作第二相分離

3、。該二維色譜不僅簡化了復雜的植物樣品制備過程，同時也擴大了峰容量增加了靈敏度，還具有高度的正交性(γ＜0.2）。這些優(yōu)勢使該方法成功應用于復雜的知母總皂苷體系中共洗脫和微量物質的分離。本實驗運用該方法成功的鑒定了31中化合物，包括5種微量化合物和4種甾體類同分異構體。該方法可作為復雜體系不分離分析的研究示范。
　　 2.采用微透析采樣結合UHPLC/QTOFMS方法檢測口服知母總皂苷后大鼠血液循環(huán)中未結合成分，這些成分被認為很可

4、能就是知母發(fā)揮藥效的潛在活性成分。通過精確分子量計算和詳細的裂解途經分析，得到包括七種原型成分和六種代謝產物，其中有三種代謝物之前未見報道而在本研究中首次得到鑒別。與傳統(tǒng)的生物采樣技術相比，微透析技術具有體內直接取樣，組織損傷輕，實時監(jiān)測及樣品制備簡單等優(yōu)點。我們的研究證明，微透析取樣輔助飛行時間質譜能夠有效地在體內同時分析多種有潛在重要生物功能的微量成分。該方法的一些重要的優(yōu)勢包括分析時間短，不出現(xiàn)帶同位素標記的化合物，使用簡便。本研

5、究可作為中藥在哺乳動物體內代謝及藥效物質成分篩選重要的研究策略。
　　 3.本研究建立了動態(tài)微透析采樣偶聯(lián)UHPLC/QTOFMS的方法和基于代謝組學數(shù)據處理技術，分析檢測口服知母總皂苷(TSA)的大鼠海馬微透析液，共鑒定得到10種知母皂苷/代謝產物，并采用半定量的方法實時監(jiān)測得到了它們在海馬中濃度的動態(tài)變化。通過比較這些皂苷的藥動學參數(shù)，發(fā)現(xiàn)知母皂苷A-Ⅲ和脫氫薩爾薩皂甙元因具有更快的吸收，較慢的代謝，更高的峰濃度和更大的血藥

6、濃度曲線下面積值，因此可作為藥代標示物的候選成分。另外，動物行為學的評價結果也和藥動學數(shù)據一致，進一步證明了上述兩種成分是知母總皂苷(TSA)神經保護作用的生物標志物。本研究表明，基于UHPLC/QTOFMS的代謝組學數(shù)據處理方法進行藥動學篩選不僅可以用于中藥發(fā)揮CNS療效的潛在活性成分研究，也可以幫助我們更好的預測天然產物中新的腦靶標成分。
　　 4.盡管近年來對阿爾茨海默癥(AD)的發(fā)病機理及抗AD藥物的研發(fā)，但是對于診斷A

7、D及監(jiān)測藥物的資料療效的生物標志物仍然未知。代謝組學能夠提供一種有效的手段有效地發(fā)現(xiàn)治療和診斷的生物標志物，他通過全面系統(tǒng)地分析個體對疾病刺激或者藥物干預后個體的代謝物相應。在本文中，使用了GC-MS、HILIC-MS和RPLC-MS的三種手段聯(lián)合檢測手段，用來分析AD相關的代謝物和講清楚知母總皂苷干預的機理。通過多元統(tǒng)計學分析，一共有21個生物標志物被篩選出來，其中異-肌醇、尿酸和色氨酸能夠幫助AD組和對照組進行最大的區(qū)分。能量代謝、