促紅細(xì)胞生成素對未成熟腦腦室周圍白質(zhì)軟化神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：通過腦內(nèi)定位注射3-硝基丙酸（3-NPA）和雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎（BCAO）方法構(gòu)建未成熟腦腦室周圍白質(zhì)軟化（PVL）動物模型，選擇死亡率低的模型進(jìn)行重組人促紅細(xì)胞生成素（rEPO）干預(yù)，觀察髓鞘磷脂蛋白（MBP）和神經(jīng)生長相關(guān)蛋白（GAP-43）的改變和行為學(xué)變化，探討EPO的神經(jīng)保護(hù)作用。 方法： 實(shí)驗(yàn)一：新生5天（P5）SD大鼠隨機(jī)分成五組，NPA組、PBS組、正常組、BCAO組和SHAM組。NPA組：腦內(nèi)注射3

2、-NPA1μl；PBS組：腦內(nèi)注射等量PBS；BCAO組：雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎；SHAM組：雙側(cè)頸總動脈僅分離不結(jié)扎；正常組：不做任何處理。于P7，P8，P14，P30作HE染色、P29～P30作懸吊試驗(yàn)、曠場試驗(yàn)、拒俘反應(yīng)和三臂迷宮等行為學(xué)測試和MRI檢查。 實(shí)驗(yàn)二：P5 SD大鼠隨機(jī)分為NPA組、EPO干預(yù)組和PBS對照組，NPA組和PBS組創(chuàng)建同實(shí)驗(yàn)一，EPO組于腦內(nèi)注射3-NPA前30分鐘腹腔注射rEPO（50u/10g），

3、于P7，P8，P14，P30進(jìn)行HE染色、MBP和GAP-43（P30）免疫熒光標(biāo)記及行為學(xué)測試（P29、P30）。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)一：1．HE染色顯示P7、P8 NPA組皮質(zhì)下及腦室周圍白質(zhì)出現(xiàn)不同程度疏松及液化灶，P14、P30出現(xiàn)NPA注射側(cè)腦室擴(kuò)大，BCAO組P7、P8腦白質(zhì)內(nèi)大量細(xì)胞凋亡壞死，P14、P30腦白質(zhì)及內(nèi)囊組織疏松，空腔形成，雙側(cè)腦室明顯擴(kuò)大；2．MRI圖像P30 NPA組可見損傷側(cè)腦室周圍T1W1低

4、信號，T2W2高信號改變，BCAO組腦室部位見T1W1低信號，T2W2高信號改變，正常組和對照組大鼠未見異常信號；3．神經(jīng)行為學(xué)檢測顯示NPA組和BCAO組有明顯的神經(jīng)行為學(xué)異常，與正常組和對照組相比有明顯差異。 實(shí)驗(yàn)二：1．EPO組HE染色示側(cè)腦室擴(kuò)大較NPA組明顯改善，差異有顯著性；2．MBP免疫熒光標(biāo)記示P7三組大鼠見MBP標(biāo)記細(xì)胞表達(dá)，細(xì)胞數(shù)無差異，EPO組P14、P30 MBP陽性細(xì)胞數(shù)較NPA組明顯增多；3．P30

5、GAP-43免疫熒光標(biāo)記示EPO組陽性細(xì)胞數(shù)較NPA組明顯增多；4．EPO組神經(jīng)行為學(xué)檢測較NPA組明顯改善。 結(jié)論： 1．NPA模型和BCAO模型均可模擬PVL的病理學(xué)改變和神經(jīng)運(yùn)動功能缺陷，NPA組死亡率低，穩(wěn)定性較好； 2．MRI可作為PVL的臨床診斷方法； 3．EPO干預(yù)后MBP標(biāo)記細(xì)胞增多，表明成熟OL的數(shù)量增加，從而減輕髓鞘形成障礙； 4．EPO可以提高GAP-43的表達(dá)水平，促進(jìn)神經(jīng)