人臍帶間充質(zhì)干細胞對未成熟腦腦室周圍白質(zhì)軟化神經(jīng)保護作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立未成熟腦腦室周圍白質(zhì)軟化(Periventricular leukomalacia,PVL)動物模型,經(jīng)腹腔移植人臍帶間充質(zhì)干細胞(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,HUcMSC),探討HUcMSC在未成熟腦定向遷移以及對受損腦組織的神經(jīng)保護作用。
  方法:5日齡(P5d)新生大鼠40只隨機分為遷移組和假手術(shù)組、HuMSCs移植組和磷酸鹽緩沖液(PBS)對照組;每組

2、各10只乳鼠。每組又根據(jù)處死注時間的不同隨機分為生后1天、19天兩個時間點。體外培養(yǎng)HUcMSC;假手術(shù)組只行血管分離,不結(jié)扎左側(cè)頒總動脈也不放入缺氧艙內(nèi)。遷移組、HUcMSC移植組和PBS對照組建立新生大鼠PVL(Periventricular Leucumalacia)動物模型。遷移組和假手術(shù)組每只實驗鼠經(jīng)腹腔給予Brdu標記的HuMSC1×107/0.05PBSml懸液注射入體內(nèi),24小時后(P6d)處死,BrdU免疫組化染色方法

3、觀察HUcMSC在實驗鼠腦內(nèi)的遷移;HUcMSC移植組和PBS對照組分別在造模后經(jīng)腹腔注射第二代HUcMSC(1×107/0.05PBSml)以及0.05mlPBS無菌溶液,在第14d,應(yīng)用7.0微型MRI(MicroMRI)掃描觀察HUcMSC對病變區(qū)域修復程度,評估實驗鼠遠期神經(jīng)行為學,MBP免疫組化療法觀察移植HUcMSC對髓鞘形成的影響,評估HUcMSC對早產(chǎn)兒PVL的神經(jīng)保護作用。
  結(jié)果:1、BrdU免疫組化染色顯示

4、移植HUcMSC后24小時,遷移組實驗鼠腦白質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)Brdu染色陽性細胞(2.10士0.99)較假手術(shù)組(0.90±0.74)多,存在統(tǒng)計學意義(P<0.05);2、移植HUcMSC組在干細胞干預后24小時應(yīng)用MicroMRI掃描在T2W2上可見明顯高信號,第14d在T2W2上未見異常信號;PBS對照組大鼠在PBS干預24小時后應(yīng)用MicroMRI掃描,在T2W2上可見明顯高信號,第14d在T1W1可見低信號,腦白質(zhì)軟化灶形成;3、第1

5、4d,HUcMSC移植組大鼠懸吊試驗(3.40±0.966)、曠場試驗(1.60±0.516)、拒俘反應(yīng)(3.00±0.816)實驗評分均較PBS對照組懸吊試驗(1.8±0.789)、曠場試驗(0.6±0.516)、拒俘反應(yīng)(1.30±1.059)高,存在統(tǒng)計學意義(P<0.05);4、兩周后移植HUcMSC組髓磷脂堿性蛋白(MBP)染色陽性細胞數(shù)(13.95±1.57)明顯多于PBS對照組(10.22±1.02),存在統(tǒng)計學意義(P<

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