氧化槐定堿基于脊髓NMDA-NO-cGMP機制的鎮(zhèn)痛作用研究.pdf

1、目的：觀察氧化槐定堿(oxysophoridine, OSR)的鎮(zhèn)痛作用，探討 OSR基于脊髓NMDA-NO-cGMP信號通路相關(guān)的鎮(zhèn)痛作用機制。
　　方法：1.行為藥理學方法①采用小鼠溫浴熱水縮尾法以熱甩尾潛伏期為指標觀察側(cè)腦室注射(intracerebroventricular injection, icv)OSR的鎮(zhèn)痛作用；②采用N-甲基-D-天門冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid, NMDA)受體激動

2、劑和拮抗劑觀察其對OSR在小鼠溫浴熱甩尾反應中痛閾變化的影響，分析NMDA受體在OSR鎮(zhèn)痛中的作用。
　　2.生化測定方法采用氨基酸自動分析儀觀察 OSR對福爾馬林致痛大鼠腰段脊髓背角組織中氨基酸含量的影響，分析氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化與其鎮(zhèn)痛作用的關(guān)系。
　　3.放射免疫方法采用放射免疫分析法觀察 OSR對溫浴刺激致痛小鼠脊髓組織中P物質(zhì)(substance P,SP)和環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosine mon

3、ophosphate,cGMP)含量的影響，分析SP和cGMP與其鎮(zhèn)痛作用關(guān)系。
　　4.免疫組織化學方法采用免疫組化方法觀察 OSR對溫浴刺激致痛小鼠脊髓NMDA受體2B亞基(NR2B)和鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ(calmodulin kinase Ⅱ,CaMKⅡ)免疫陽性細胞表達的影響，探討其表達變化與OSR鎮(zhèn)痛作用之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.側(cè)腦室注射OSR的鎮(zhèn)痛作用OSR(25,12.5,6.25 mg/kg, icv)能明顯

4、延長小鼠溫浴熱甩尾在10、20、30、45、60、90min的潛伏期(P<0.05, P<0.01)，最大痛閾提高率可達62.33％。
　　2.NMDA受體激動劑和拮抗劑對OSR鎮(zhèn)痛作用的影響氯胺酮(ketamine,KET)(2.5mg/kg, ip)、地卓西平(dizocilpine,MK-801)(0.05g/kg, iv)和艾芬地爾(ifenprodil,IFE)(1mg/kg,iv)可明顯提高閾下鎮(zhèn)痛劑量OSR(3.13

5、 mg/kg, icv)在小鼠溫浴熱甩尾反應中的痛閾(P<0.05, P<0.01)；NMDA(15 mg/kg, iv)可顯著對抗OSR(12.5 mg/kg, icv)的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05, P<0.01)；提示NMDA受體參與了OSR的鎮(zhèn)痛作用。
　　3.OSR對脊髓痛相關(guān)遞質(zhì)含量的影響①OSR(1000，500 mg/kg,ip)可使福爾馬林致痛大鼠脊髓組織中谷氨酸(glutamate,Glu)和亮氨酸(leucine

6、，Leu)含量明顯降低(P<0.05)，甘氨酸(glycine,Gly)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量顯著增加(P<0.05，P<0.01)；②OSR(12.5 mg/kg, icv)對正常小鼠脊髓組織SP含量無明顯影響(P>0.05)，在熱刺激前給藥可明顯降低溫浴致痛小鼠SP含量(P<0.01)；提示OSR的鎮(zhèn)痛作用與調(diào)節(jié)脊髓組織中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)和SP含量表達有關(guān)。
　　4.OSR對小鼠

7、脊髓背角NR2B亞型免疫陽性細胞表達的影響 OSR(12.5 mg/kg, icv)對正常小鼠脊髓組織NR2B免疫陽性細胞表達無明顯影響(P>0.05)；在熱刺激前、后給藥可明顯降低溫浴致痛小鼠脊髓組織NR2B免疫陽性細胞數(shù)及平均光密度(P<0.05, P<0.01)；刺激后給藥可顯著增加平均灰度值及降低陽性面積比(P<0.05)。提示脊髓組織NR2B免疫陽性細胞表達變化是OSR鎮(zhèn)痛作用的分子機制之一。
　　5.OSR對小鼠脊髓背

8、角組織cGMP含量和CaMKⅡ表達的影響 OSR(12.5 mg/kg, icv)對正常小鼠脊髓組織cGMP含量及CaMKⅡ免疫陽性細胞表達均未見有明顯影響(P>0.05)。在熱刺激前、后給藥可明顯降低溫浴致痛小鼠脊髓組織cGMP含量、CaMKⅡ免疫陽性細胞的數(shù)目和陽性面積比，增加CaMKⅡ陽性細胞平均灰度值(P<0.05, P<0.01)；刺激后給藥可顯著降低溫浴致痛小鼠脊髓組織CaMKⅡ免疫陽性細胞平均光密度(P<0.01)。此結(jié)果