卡介苗與滅活卡介苗對(duì)機(jī)體免疫功能的影響及抗白血病作用的研究.pdf

1、第一部分 目的:探討卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)對(duì)急性白血病患兒外周血來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)體外擴(kuò)增的影響，并對(duì)卡介苗與滅活卡介苗(Non-viable Bacillus Calmette-Guerin，NV-BCG)的作用進(jìn)行比較。 方法:采用Ficoll-Hypaque法分離急性白血病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMNC)，將本實(shí)驗(yàn)分為分為6組①對(duì)照組（

2、僅加入RPMI1640完全培養(yǎng)液+1×106個(gè)單個(gè)核細(xì)胞）；②BCG組(與對(duì)照組等量的單個(gè)核細(xì)胞+BCG3×104cfu);③NV-BCG組(與對(duì)照組等量的單個(gè)核細(xì)胞+NV-BCG3×104cfu)；④GTI組(與對(duì)照組等量的單個(gè)核細(xì)胞+thGM-CSF100 ng/ml、thTNF-α10 ng/ml、IL-450 ng/ml)；⑤GTIB組(與對(duì)照組等量的單個(gè)核細(xì)胞十與GTI組等量的細(xì)胞因子+BCG3×104cfu)；⑥GTINB組

3、(與對(duì)照組等量的單個(gè)核細(xì)胞十與GTI組等量的細(xì)胞因子+NV-BCG3×104cfu)，培養(yǎng)至第9天，對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞免疫表型，并行瑞氏一姬姆薩染液染色，在油鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)。 結(jié)論: 1、BCG能促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞的增殖，但其促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞增殖的能力弱于細(xì)胞因子的聯(lián)合作用。 2、BCG不僅能促進(jìn)白血病患兒外周血樹(shù)突狀細(xì)胞的體外擴(kuò)增，還能協(xié)同細(xì)胞因子促進(jìn)其成熟。 3、NV-B

4、CG在促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞增殖及樹(shù)突狀細(xì)胞成熟方面與BCG無(wú)明顯差異。 第二部分 目的:探討卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)對(duì)急性白血病患兒外周血樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響，并對(duì)卡介苗與滅活卡介苗(Non-viable Bacillus Calmette-Guerin，NV-BCG)進(jìn)行比較。 方法:應(yīng)用Ficoll-Hypaque法分離急性白血病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMNC)，分為5組

5、：①對(duì)照組（GTI組）（1×106/mlPBMNC+thGM-CSF100ng/ml，thTNF-α10ng/ml，thIL-450ng/ml）；②BCG組(與對(duì)照組等量PBMNC+BCG3×104cfu)；③NV-BCG組(與對(duì)照組等量PBMNC+NV-BCG3×104cfu);④GTB組（與對(duì)照組等量PBMNC+與對(duì)照組等量的細(xì)胞因子+BCG3×104cfu）；⑤GTINB組(與對(duì)照組等量PBMNC+與對(duì)照組等量的細(xì)胞因子+NV-B

6、CG3×104cfu)。光學(xué)顯微鏡下每日觀察DC的形態(tài)，培養(yǎng)9天后收獲DC，而后將DC與兒童急性白血病同種異體外周血淋巴細(xì)胞混合反應(yīng)96h后觀察淋巴細(xì)胞的增殖情況，ELISA方法檢測(cè)上清中其IL-12、IFN-γ的分泌情況，另將培養(yǎng)9天后的HL-60抗原致敏后的DC與已培養(yǎng)7天的淋巴細(xì)胞及HL-60細(xì)胞共孵育72h，觀察不同組別DC對(duì)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)特異性殺傷HL-60細(xì)胞活性影響的不同。MTT法檢測(cè)其殺傷活性。 結(jié)

7、論: 1、BCG誘導(dǎo)后的DC能促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和分泌，且隨著刺激細(xì)胞數(shù)目的增加，T細(xì)胞擴(kuò)增能力進(jìn)一步增強(qiáng)；其殺傷白血病細(xì)胞活性較GTI組增強(qiáng)。提示BCG能夠促進(jìn)DC的成熟，增強(qiáng)DC抗原提呈能力，從而增強(qiáng)急性白血病患兒外周血來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)的抗白血病免疫效應(yīng)。 2、BCG聯(lián)合細(xì)胞因子應(yīng)用后能促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和分泌，使T細(xì)胞殺傷白血病細(xì)胞活性的效果更為明顯。 3.NV-BCG能誘導(dǎo)DC產(chǎn)生，并促進(jìn)T細(xì)胞的增殖分泌及