ICAM-1基因多態(tài)性與大腸癌發(fā)生與發(fā)展的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討中國華北地區(qū)人群中ICAM-1基因G241R、K469E多態(tài)性特征以及與大腸癌之間的相關(guān)性，為大腸癌的預(yù)防和預(yù)后評價(jià)提供遺傳學(xué)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1材料
　　 1.1血液標(biāo)本：選取河北醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)院外二科2007年12月～2008年6月間住院確診的大腸癌患者87例及非大腸癌對照組102例。
　　 1.2組織標(biāo)本：選取與血液標(biāo)本相對應(yīng)的大腸癌術(shù)后患者30例，分別取其腫瘤組織與相應(yīng)正常

2、組織。
　　 2方法
　　 2.1 PCR-SSP分析：應(yīng)用等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-SSP）技術(shù)鑒定大腸癌組和對照組的ICAM-1基因G241R和K469E多態(tài)性的基因型分布及等位基因頻率分布，依據(jù)是否能夠擴(kuò)增出特異性927 bp條帶以確定受檢者的基因型。PCR引物序列如下：
　　 上游序列：（包括兩條G241R位點(diǎn)引物）
　　 1：5'GTGGTCTGTTCCCTGGACG3'（G241）；

3、
　　 2：5'GTGGTCTGTTCCCTGGACA3'（R241）。
　　 下游序列：（包括兩條K469E位點(diǎn)引物）
　　 3：5'GCACATTCACGGTCACCTC3'（E469）；
　　 4：5'GCACATTCACGGTCACCTT3'（K469）。
　　 內(nèi)參照GAPDH：
　　 上游引物：GAAGGTGAAGGTCGGAGT；
　　 下游引物：GAAGATGGTG

4、ATGGGATTTC。
　　 2.2 Western blot分析：將正常及大腸癌組織于冰浴下勻漿，離心分離上清，蛋白定量后取蛋白提取液60μg，按比例與5×SDS上樣緩沖液混勻，煮沸后，上樣，進(jìn)行SDS-PAGE。電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。將印跡膜置于封閉液中封閉，隨后與相應(yīng)的一抗及二抗反應(yīng)，最后用化學(xué)發(fā)光法檢測抗原抗體結(jié)合區(qū)帶。用數(shù)碼成像分析系統(tǒng)軟件對結(jié)果進(jìn)行定量分析。
　　 結(jié)果：
　　 1 ICAM-1基因G

5、241R位點(diǎn)不具多態(tài)性
　　 在我們研究的189名對象（包括大腸癌組和對照組）中，G241R位點(diǎn)均為GG型，未檢測出R241等位基因。表明此SNP在我國華北地區(qū)人群中非常罕見，中國華北地區(qū)人群此位點(diǎn)并不存在多態(tài)性。
　　 2 ICAM-1多態(tài)性各基因型在大腸癌患者中的分布頻率及其與腫瘤分化程度的關(guān)系
　　 依據(jù)ICAM-1基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物得到三種K469E基因型，即KK、KE、EE。據(jù)大腸癌分化程度不同分為低分

6、化組和高分化組。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，低分化組中，KK基因型比例為28.0％（7/25），而高分化組中KK基因型為53.2％（33/62）；相應(yīng)地，在低分化組中，KE+EE基因型所占比例高于高分化癌組，二者相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P<0.05）。但不同基因型與臨床其他病理參數(shù)如性別、年齡、腫瘤部位和轉(zhuǎn)移及Dukes分期等未見明顯相關(guān)（P>0.05）。
　　 3不同種族人群之間ICAM-1基因多態(tài)性的差異比較
　　 查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)G

7、241R位點(diǎn)是歐美人群中普遍存在的遺傳學(xué)變異，其G等位基因頻率在0.796-0.971之間。而在亞洲人群中，日韓人群中不存在此遺傳學(xué)變異，與中國人群的情況相似。K469E位點(diǎn)在歐美和亞裔人群中差異較大，文獻(xiàn)報(bào)道K等位基因頻率在0.437-0.630之間，普遍低于本研究人群；而在亞洲人群中，日韓人群與中國人群差別不大。
　　 4 ICAM-1基因K469E多態(tài)性與大腸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系
　　 K469E多態(tài)性在大腸癌組中的

8、基因型分布頻率為：KK型57.47％（50/87）、KE型32.18％（28/87）、EE型10.35％（9/87）；在非大腸癌的對照組，則分別為42.16％（43/102）、43.14％（44/102）、14.7％（15/102）。大腸癌組KK基因型頻率組間比較差異有顯著性（X2=4.406，p=0.036）?；蛐皖l率的相對風(fēng)險(xiǎn)分析發(fā)現(xiàn)，KK基因型患大腸癌的風(fēng)險(xiǎn)是KE+EE基因型的1.85倍（OR=1.85，95％CI：1.04～3

9、.31）。
　　 大腸癌組K、E等位基因頻率分別為73.56％和26.44％，對照組分別為63.73％和36.27％，兩組比較差異有顯著性，大腸癌組K等位基因頻率明顯高于對照組（X2=4.194，p=0.041），等位基因頻率的相對風(fēng)險(xiǎn)分析發(fā)現(xiàn)，K等位基因攜帶者患病風(fēng)險(xiǎn)增加了1.58倍（OR=1.58，95％CI：1.02～2.46）。
　　 5不同基因型個(gè)體大腸癌組織中ICAM-1蛋白表達(dá)水平的比較
　　 We

10、stern blot分析表明，來自不同基因型個(gè)體的癌旁正常組織中檢測到的ICAM-1表達(dá)水平相對定量分析顯示，其組間均數(shù)比較，無顯著性差異（P>0.05）；同一基因型的腫瘤組織與正常組織比較，KK基因型腫瘤組織中的ICAM-1蛋白表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），相反，KE+EE基因型的ICAM-1蛋白表達(dá)水平在腫瘤組織中和正常組織中比較無顯著性差異；腫瘤組織之間比較，KK基因型標(biāo)本中檢測到的ICAM-1蛋

11、白表達(dá)水平明顯的高于KE+EE基因型標(biāo)本（P<0.05），這些結(jié)果表明，具有KK基因型的大腸癌個(gè)體，其ICAM-1表達(dá)的激活可能參與了大腸癌的發(fā)生。
　　 結(jié)論：
　　 1大腸癌組和對照組ICAM-1基因G241R多態(tài)性均為GG基因型，中國華北地區(qū)人群此位點(diǎn)不存在多態(tài)性。
　　 2 ICAM-1基因的K469E多態(tài)性與大腸癌發(fā)生具有顯著相關(guān)性：KK基因型與大腸癌的發(fā)生具有相關(guān)性；K等位基因與大腸癌的遺傳易感性有關(guān)