骨橋蛋白新功能表位的篩選與鑒定.pdf

1、骨橋蛋白(osteopotin，OPN)，也稱為早期T淋巴細胞激活因子1，它是一種多功能的細胞外基質(zhì)蛋白，具有多種生理和病理功能，包括骨的修復，腫瘤和炎癥。OPN蛋白在多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎和炎性腸炎等自身免疫性疾病的病理部位明顯增高。OPN作為自身免疫病發(fā)病潛在的關鍵因子已成為人們關注的焦點。T細胞介導的炎癥在自身免疫病中起著非常重要的作用。OPN通過和細胞表面的相應受體相互作用，誘導其下游的信號轉(zhuǎn)導通路，介導淋

2、巴細胞的遷移及活化。OPN分子上具有多個不同的功能表位，每一個功能表位所結(jié)合的受體不同，從而介導不同的功能。值得注意的是OPN的N端(包括第四和第五外顯子)的受體其生理功能還未確定。 為了進一步研究OPN分子中的功能表位及其在自身免疫性疾病中的作用，我們利用雜交瘤技術(shù)制備了兩株新的抗OPN單克隆抗體：23C3D3和F8E11；通過噬菌體隨機肽庫篩選技術(shù)，鑒定了兩株抗OPN抗體的抗原表位分別為WLNPDP和QLYNKYP。23C3

3、D3能夠有效抑制Ⅱ型膠原誘導的關節(jié)炎小鼠模型的疾病進程，甚至能夠顯著改善已經(jīng)建立的類風濕性關節(jié)炎模型小鼠的癥狀。23C3D3也能夠有效抑制促炎癥因子的產(chǎn)生和關節(jié)炎小鼠關節(jié)組織中T淋巴細胞的浸潤。在CIA小鼠來源的淋巴細胞模型中，表位肽23P(包含有WLNPDP基序)和表位WLNPDP的阻斷抗體23C3D3能有效抑制OPN誘導的細胞粘附、遷移和存活。突變WLNPDP構(gòu)建OPN突變體，突變后的OPN對淋巴細胞活化的能力顯著減弱。功能實驗的結(jié)