兩種與水稻OsRacD互作的肌球蛋白重鏈編碼基因的特征分析.pdf

1、OsRacD是水稻Rho家族的一個(gè)新成員，已有的研究結(jié)果顯示，功能之一是調(diào)控花粉管的延伸生長，是光敏核不育水稻農(nóng)墾58S光周期育性轉(zhuǎn)換相關(guān)信號通路中的一個(gè)重要基因。為進(jìn)一步研究OsRacD相關(guān)信號通路及互作蛋白，梁衛(wèi)紅等以O(shè)sRacD為誘餌，采用酵母雙雜交體系從水稻幼穗中篩選到若干互作蛋白編碼基因的cDNA序列。本文對其中兩種新的水稻肌球蛋白重鏈基因OsMY1(NO：DQ641916)和OsMY2(NO：DQ641917)進(jìn)行了研究。

2、 利用網(wǎng)絡(luò)工具和生物軟件對OsMY1、OsMY2核苷酸序列及其編碼蛋白進(jìn)行了預(yù)測和分析，結(jié)果顯示二者核苷酸同源性為85％，都具有卷曲螺旋區(qū)及多種蛋白修飾位點(diǎn)，屬于水稻肌球蛋白重鏈XI。兩個(gè)基因均位于水稻的1號染色體上，推測OsMY2全長10566 bp，包括9個(gè)內(nèi)含子和10個(gè)外顯子，編碼947個(gè)氨基酸，具有一個(gè)Smc結(jié)構(gòu)域。分別構(gòu)建了兩種基因的原核表達(dá)載體pGEX-4T1/OsMY1和pGEX-4T1/OsMY2，進(jìn)行了原核表達(dá)和

3、純化。檢測結(jié)果顯示帶有GST標(biāo)簽的OsMY1和OsMY2主要以可溶形式存在于細(xì)菌裂解液上清中，約占細(xì)菌總蛋白質(zhì)量的40％以上，以抗GST標(biāo)簽的抗體進(jìn)行Western blot檢測，證實(shí)了融合蛋白表達(dá)和純化的正確性。以組成型表達(dá)的水稻肌動蛋白基因OsAct1為內(nèi)參，運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)分析OsMY1和OsMY2在時(shí)空表達(dá)特性，結(jié)果顯示二者在水稻不同時(shí)期不同組織中都有表達(dá)，但是表達(dá)量有變化，且具有不同的表達(dá)特性。隨著生長期的延長，Os

4、MY1在葉的表達(dá)活性稍有增加，而在根部的表達(dá)活性先是稍有增加后又稍有下降，在同一個(gè)生長期內(nèi)在綠葉中的表達(dá)活性相對于在黃化葉和根部中稍有增加；而OsMY2無論是在地上部分還是在根部，表達(dá)活性都是先增加后降低，在同一個(gè)時(shí)期該基因在根部表達(dá)活性明顯高于在綠苗和黃化苗中的表達(dá)量。 本研究為進(jìn)一步確定OsMY1、OsMY2的功能，以及與OsRacD蛋白的互作關(guān)系、功能聯(lián)系奠定了基礎(chǔ)，有助于從信號通路中蛋白互作的角度探索和解析水稻光周期育性