水稻黑條矮縮病毒P6蛋白與病毒編碼的部分蛋白及水稻蛋白間的互作.pdf

1、水稻黑條矮縮病毒(Rice black streaked dwarf virus，RBSDV)引起的水稻黑條矮縮病是當前水稻、玉米上的最重要病毒病之一，其分布在我國十分廣泛。RBSDVS6編碼的P6蛋白已報道為基因沉默抑制子。
　　 本文采用RT-PCR擴增江蘇和福建水稻RBSDV分離物，將RT-PCR擴增產物與克隆載體連接，轉化大腸桿菌DH5α并測序。對測序結果分析表明：江蘇水稻分離物為水稻黑條矮縮病毒；福建水稻病株分離物含有

2、水稻黑條矮縮病毒及南方水稻黑條矮縮病毒。采用酵母雙雜交系統(tǒng)對P6進行研究。將江蘇分離物擴增產物分別與酵母表達載體pGADT7及pGBKT7連接，構建重組子pGADT7-S5A、pGADT7-S8、pGADT7-S9-1、pGADT7-S9-2及pGBKT7-S6。蛋白間相互作用情況顯示：未檢測到pGBKT7-S6與pGADT7-S5A、pGADT7-S8、pGADT7-S9-1、pGADT7-S9-2間相互作用，表明P6與S5A、S8、

3、S9-1、S9-2編碼蛋白可能不存在互作。
　　 利用酵母雙雜交系統(tǒng)以pGBKT7-S6為誘餌篩選水稻幼苗葉片cDNA文庫，獲得4個_陽性克隆：SR-1、SR-2、SR-3及SR-4。將篩選到的陽性克隆在GenBank數據庫或TIGR Rice Genome Annotation數據庫中進行blast比對，尋找同源序列。根據同源基因的注釋及前人對同源基因的研究可知：與SR-1高度同源的水稻蛋白功能還不清楚，與SR-2、SR-3、