與水稻黑條矮縮病毒P6互作的水稻寄主因子及與南方水稻黑條矮縮病毒CP互作的白背飛虱介體因子篩選.pdf

1、水稻病毒是水稻生產(chǎn)上一類重要的病原物，在我國水稻種植地區(qū)廣泛流行，給水稻生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解析病毒與寄主和介體的互作機(jī)理，本論文利用水稻黑條矮縮病毒（Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV）的沉默抑制子蛋白P6和南方水稻黑條矮縮病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus，SRBSDV)的外殼蛋白(coat protein，CP)為誘餌分別篩選水稻

2、和白背飛虱的cDNA文庫，獲得與RBSDV P6互作的水稻寄主因子和與SRBSDV CP互作的白背飛虱介體因子。
　　1.與RBSDV P6互作的水稻寄主因子篩選
　　構(gòu)建了pGBKT7-P6(RBSDV)酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒，并確定P6在酵母細(xì)胞中沒有毒性和自激活活性。然后將誘餌質(zhì)粒與水稻葉片cDNA文庫質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母菌株AH109，經(jīng)過三缺(SD/-His/-Leu/-Trp)和四缺(SD/-His/-Leu/-Trp/-

3、Ade)培養(yǎng)基的篩選，最終獲得8個在酵母中與RBSDV P6互作的寄主因子片段。這8個寄主因子分別為:一個具有PHD保守結(jié)構(gòu)域的蛋白、乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)、COP9信號轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合體5b亞基蛋白(COP9 signalosome complex subunit5b)、一個未知功能蛋白（以下簡稱P6-100）、含有類似于葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nucleasehomologues，S

4、Nase)保守結(jié)構(gòu)域的蛋白、ATP合成酶δ鏈(putative ATP synthase deltachain)、泛素結(jié)合催化酶E2(Ubiquitin-conjugating enzyme E2，catalytic)和己四醇醛酸脫羧酶(UDP-glucuronic acid decarboxylase)?？寺×怂綪6-100蛋白的編碼基因全長，并利用酵母雙雜交系統(tǒng)和雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證P6-100蛋白與RBSDVP6的互作。這些初

5、步工作為進(jìn)一步深入了解該病毒與水稻寄主間的作用機(jī)理打下基礎(chǔ)。
　　2.與SRBSDV CP互作的白背飛虱介體因子的篩選
　　構(gòu)建了pGBKT7-CP(SRBSDV)酵母雙雜交誘餌質(zhì)粒，并確定SRBSDV CP在酵母細(xì)胞中沒有毒性和自激活活性。然后將誘餌質(zhì)粒與白背飛虱cDNA文庫質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵母菌株AH109，經(jīng)過三缺（SD/-His/-Leu/-Trp）和四缺（SD/-His/-Leu/-Trp/-Ade）培養(yǎng)基的篩選，共獲得

6、6個在酵母中與SRBSDV CP互作的蛋白片段。這6個蛋白片段分別是:肌動蛋白(actin)、磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，GAPDH3)、HIPV(Himetobi P virus)的外殼蛋白、線粒體蛋白、GMP合成酶(GMP synthase)以及TCP1伽瑪亞基(TCP1 subunit gamma)。這些與病毒互作的介體因子片段的獲得為深入了解該病毒與昆蟲介體間