玉米自交系植株水稻黑條矮縮病毒的積累.pdf

1、玉米粗縮病是一種嚴(yán)重危害玉米的病毒病害，該病是由水稻黑條矮縮病毒（RBSDV）引起。RBSDV是一種雙鏈RNA病毒，曾在中國、日本等國家流行，嚴(yán)重影響玉米產(chǎn)量。
　　 本文首先對應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫法（ID-ELISA）測定玉米葉片中RBSDV的實驗條件進行探索，然后在抗病性鑒定的基礎(chǔ)上，按照玉米粗縮病病情嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)，采集不同病級葉片，對不同抗性玉米自交系、不同病級植株體內(nèi)的RBSDV增殖差異做了初步研究，同時確定了競爭酶聯(lián)免疫

2、方法對不同品種、不同病級植株體內(nèi)內(nèi)源激素的檢測方法，對不同抗性玉米自交系中內(nèi)源激素水平差異做了初步分析。
　　 將水稻黑條矮縮病毒（RBSDV）主要外殼蛋白P10的單克隆抗體應(yīng)用于玉米病株葉片中RBSDV的檢測，對實驗所需包被緩沖液、抗血清使用濃度、樣品稀釋度、樣品儲存條件作了一系列優(yōu)化選擇。結(jié)果顯示：檸檬酸緩沖效果最好，PBS緩沖液次之，碳酸緩沖液最差；RBSDV P10單克隆抗體倍比稀釋至1，000×、1，500×和2，00

3、0×，均可檢測到RBSDV，標(biāo)本OD值/陰性對照OD值（P/N）在2.631～5.027之間，選擇2，000×的稀釋濃度為最經(jīng)濟、高效；ID-ELISA檢測RBSDV，經(jīng)1/80稀釋后，在新鮮和4℃保存1d的標(biāo)樣中，仍能檢測出RBSDV，P/N值為2.836～2.681。但隨稀釋度增大，P/N值減小，因此抗原的研磨稀釋使用濃度以1/10～20（W：V）為最好。在-20℃保存1周的標(biāo)樣中稀釋10倍未檢測到RBSDV，P/N值為1.555<

4、2?？梢姡瑱z測玉米葉片中的RBSDV的ID-ELISA適宜方法為：使用檸檬酸緩沖液（pH6.1）、RBSDV P10單克隆抗體稀釋濃度1：2000，用新鮮玉米葉片標(biāo)樣，研磨稀釋10～20倍。
　　 在抗病性鑒定的基礎(chǔ)上，根據(jù)玉米粗縮病的病情嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)，對已知抗性水平的抗、中抗和感病自交系材料逐株進行病情嚴(yán)重度分級調(diào)查。采集不同級別病株的新葉，用ID-ELISA檢測病株葉片中的RBSDV相對濃度。結(jié)果顯示：同一抗性水平、不同級

5、別的自交系病株葉片內(nèi)的RBSDV濃度有顯著差異，隨病株病級加大，病毒濃度升高；而相同病級、不同抗性水平自交系葉片內(nèi)的RBSDV濃度無顯著差別；但抗病自交系病株葉片中的病毒總濃度顯著低于感病自交系材料。此試驗結(jié)果表明：玉米粗縮病病株葉片內(nèi)的病毒濃度與生物學(xué)癥狀呈正相關(guān)，病毒濃度越高，病情越重。RBSDV一旦侵入寄主，在抗病、感病和中抗的自交系植株體內(nèi)均可增殖，并運轉(zhuǎn)到新生葉片。此結(jié)論為揭示玉米抗粗縮病的機理奠定了基礎(chǔ)。
　　 EL