水稻黑條矮縮病毒(RBSDV)p8蛋白與寄主水稻因子OsGID1的互作研究.pdf

1、植物病毒是細(xì)胞內(nèi)病原體，僅編碼少量的病毒蛋白，必須利用宿主因子來完成其生命周期。病毒蛋白，如外殼蛋白、復(fù)制相關(guān)蛋白、運(yùn)動(dòng)蛋白、病毒沉默抑制子等，常通過與寄主因子相互作用參與病毒的增殖、運(yùn)動(dòng)、傳播，并可能誘發(fā)寄主植物發(fā)育異常、黃化、壞死等一系列癥狀。因此，揭示病毒蛋白與寄主因子的相互作用有助于了解病毒致病機(jī)制、發(fā)展病毒防控新策略。
　　水稻黑條矮縮病的病原是水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streaked dwarfviru

2、s，RBSDV)。該病毒是呼腸孤病毒科(Reoviridae)斐濟(jì)病毒屬（Fijivirus）的一個(gè)確定成員，由介體灰飛虱（Laodelphax striatellus）傳播。感染了RBSDV的水稻植株多表現(xiàn)出植株矮縮、分蘗增多、葉色濃綠和沿葉脈出現(xiàn)瘤狀突起等明顯的癥狀。RBSDV基因組由10條雙鏈RNA(dsRNA)組成，分別命名為S1-S10，水稻全基因組序列的測定已完成，其中基因組S8編碼的蛋白質(zhì)p8是病毒粒子的核心結(jié)構(gòu)蛋白，并存

3、在一個(gè)保守的NTP結(jié)合域。但RBSDV p8與寄主水稻因子之間的互作尚不清楚。
　　本研究首先以RBSDV p8為誘餌，利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選水稻cDNA文庫，共獲得3個(gè)可能與p8互作的寄主因子。其中1個(gè)潛在互作因子，即赤霉素不敏感矮縮蛋白1(Gibberellin-insensitive dwarf protein1，OsGID1)，全長編碼區(qū)被克隆并用于進(jìn)一步的研究。酵母雙雜交、BiFC和pull-down試驗(yàn)結(jié)果一致表明RB

4、SDV p8與OsGID1之間在體內(nèi)外均存在強(qiáng)烈的相互作用。亞細(xì)胞定位試驗(yàn)表明RBSDV p8和寄主因子OsGID1可以分別單獨(dú)定位于煙草表皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。同時(shí)，RBSDV p8和OsGID1還可以在煙草表皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中共定位，這進(jìn)一步證明了RBSDV p8和OsGID1之間的互作關(guān)系。進(jìn)一步通過酵母雙雜交試驗(yàn)分析表明RBSDV p8和OsGID1互作的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域位于p8的339-489aa區(qū)域。此外，通過花序浸潤法