水稻黑條矮縮病毒(RBSDV)p8蛋白與寄主水稻因子OsGID1的互作研究.pdf

1、植物病毒是細胞內病原體，僅編碼少量的病毒蛋白，必須利用宿主因子來完成其生命周期。病毒蛋白，如外殼蛋白、復制相關蛋白、運動蛋白、病毒沉默抑制子等，常通過與寄主因子相互作用參與病毒的增殖、運動、傳播，并可能誘發(fā)寄主植物發(fā)育異常、黃化、壞死等一系列癥狀。因此，揭示病毒蛋白與寄主因子的相互作用有助于了解病毒致病機制、發(fā)展病毒防控新策略。
　　水稻黑條矮縮病的病原是水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streaked dwarfviru

2、s，RBSDV)。該病毒是呼腸孤病毒科(Reoviridae)斐濟病毒屬（Fijivirus）的一個確定成員，由介體灰飛虱（Laodelphax striatellus）傳播。感染了RBSDV的水稻植株多表現(xiàn)出植株矮縮、分蘗增多、葉色濃綠和沿葉脈出現(xiàn)瘤狀突起等明顯的癥狀。RBSDV基因組由10條雙鏈RNA(dsRNA)組成，分別命名為S1-S10，水稻全基因組序列的測定已完成，其中基因組S8編碼的蛋白質p8是病毒粒子的核心結構蛋白，并存

3、在一個保守的NTP結合域。但RBSDV p8與寄主水稻因子之間的互作尚不清楚。
　　本研究首先以RBSDV p8為誘餌，利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選水稻cDNA文庫，共獲得3個可能與p8互作的寄主因子。其中1個潛在互作因子，即赤霉素不敏感矮縮蛋白1(Gibberellin-insensitive dwarf protein1，OsGID1)，全長編碼區(qū)被克隆并用于進一步的研究。酵母雙雜交、BiFC和pull-down試驗結果一致表明RB

4、SDV p8與OsGID1之間在體內外均存在強烈的相互作用。亞細胞定位試驗表明RBSDV p8和寄主因子OsGID1可以分別單獨定位于煙草表皮細胞的細胞質和細胞核中。同時，RBSDV p8和OsGID1還可以在煙草表皮細胞的細胞質和細胞核中共定位，這進一步證明了RBSDV p8和OsGID1之間的互作關系。進一步通過酵母雙雜交試驗分析表明RBSDV p8和OsGID1互作的關鍵結構域位于p8的339-489aa區(qū)域。此外，通過花序浸潤法