翹嘴鱖肌球蛋白重鏈(MyHC)基因的克隆及其特征分析.pdf

1、肌球蛋白重鏈(MyHC)是骨骼肌的主要結(jié)構(gòu)和收縮蛋白。本文以翹嘴鱖背側(cè)白肌為實驗材料,采用Trizol法提取白肌總RNA,然后反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA為模板,根據(jù)Genbank數(shù)據(jù)庫中相近物種的MyHC基因保守序列,設(shè)計三對引物,分別通過三組PCR克隆、產(chǎn)物測序、序列拼接后獲得翹嘴鱖肌球蛋白重鏈基因的完整開放閱讀框。
　　 翹嘴鱖MyHC基因閱讀框全長5814bp,編碼1937個氨基酸,分子量大小大約為220kDa,其等電點為5.

2、61。其中疏水性氨基酸606個(A,I,L,F,W,V),親水性氨基酸451個(N,C,Q,S,T,Y),1937個氨基酸中親水性氨基酸多集中于100-800位,而疏水性氨基酸多集中在Myosintail1保守區(qū)域。由于疏水性氨基酸所占的比例比較大,總體上翹嘴鱖肌球蛋白重鏈屬于疏水性蛋白。翹嘴鱖肌球蛋白重鏈強堿性氨基酸309個(K,R),強酸性氨基酸355個(D,E),強堿性和強酸性氨基酸含量差別不太大。密碼子統(tǒng)計分析也表明:翹嘴鱖肌球

3、蛋白重鏈cDNA的堿基組成不存在明顯的偏好性,但是整個cDNA序列中C和T堿基含量較低,僅分別為20.9％和20.31%。同時,各個位點的堿基含量也各不相同,第一位堿基具有較高的A和G堿基(35.1%,37.1%),第二位具有較高的A堿基(43.8%),第三位具有較高的G堿基。
　　 翹嘴鱖MyHC主要是由3部分組成:S1、S2和LMM區(qū)域。其中S1區(qū)有三個ATP結(jié)合位點、三個actin結(jié)合位點和兩個Loop表面環(huán)。通過氨基酸序

4、列比對發(fā)現(xiàn),翹嘴鱖MyHC的S1、S2和LMM三個區(qū)域與大眼鱖、白姑魚和鯉魚等魚的同源性分別為90.7%-95.7%、91.5%-93.7%和89.9%-99.5%,具有很高的同源性。其中三個ATP結(jié)合位點和三個actin結(jié)合位點高度保守,而兩個Loop表面環(huán)保守性較低。
　　 通過GenBank中查詢得到11種魚的MyHC的氨基酸序列,利用CLUSTALX1.83和MEGA4.0軟件與本實驗所克隆出來的翹嘴鱖MyHC的氨基酸序