POR和MDR1基因多態(tài)性對硝苯地平人體藥動(dòng)學(xué)的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　硝苯地平是細(xì)胞色素P450酶系(CYP)3A經(jīng)典的代謝底物。細(xì)胞色素P450氧化還原酶(Cytochrome P450 oxidoreductase，POR)是目前發(fā)現(xiàn)的所有CYP同工酶的唯一電子供體。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證明，POR活性降低可引起多種CYP同工酶活性降低。編碼人POR的基因具有明顯的基因多態(tài)性，在這些已知的功能性單核苷酸多態(tài)性中，POR*28(A503V)變異頻率較高，因此，對POR*28多態(tài)性

2、進(jìn)行藥物基因組學(xué)研究具有重要的臨床意義。P-糖蛋白(P-gp)是多藥耐藥基因(Multidrug resistance 1，MDR1)的產(chǎn)物，能夠能量依賴性地將細(xì)胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外。MDR1基因C1236T、G2677T/A和C3435T位點(diǎn)變異率較高，研究報(bào)道較多。硝苯地平屬于P-gp底物，但未見MDR1基因多態(tài)性對硝苯地平藥動(dòng)學(xué)影響的報(bào)道。
　　本研究目的探討POR*28及MDR1C3435T基因多態(tài)性對硝苯地平在健康人體內(nèi)

3、藥動(dòng)學(xué)的影響，為實(shí)現(xiàn)硝苯地平個(gè)體化用藥提供依據(jù)。
　　研究方法:
　　1.研究對象
　　共有45名中國健康受試者參與研究，其中男32例，女13例。平均年齡23.13±1.89y，平均身高170.03±7.25cm，平均體重65.17±7.96kg。檢查血尿常規(guī)、肝腎功能及心電圖，各項(xiàng)檢查指標(biāo)均正常。所有受試者均無藥物過敏史，在參與實(shí)驗(yàn)前兩周及實(shí)驗(yàn)期間未服用其他任何藥物。該研究得到鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有

4、受試者均自愿參加試驗(yàn)并于試驗(yàn)前由本人簽署知情同意書。
　　2.試驗(yàn)方案
　　所有受試者在服藥前禁食10h，分別在單次服用90mg硝苯地平后，定時(shí)采血，用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析受試者硝苯地平血藥濃度并進(jìn)行相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算。
　　3.POR*28和MDR1C3435T基因型分析
　　用酚氯仿法提取基因組DNA，POR*28基因型用PCR產(chǎn)物直接測序法檢測，MDR1C3435T基因型用PCR-RFLP法檢測。

5、根據(jù)檢測結(jié)果，POR*28CC、CT和TT3種基因型分別為15、24和6例;MDR1CC、CT、TT3種基因型分別為13、24和8例。
　　4.硝苯地平血藥濃度測定
　　用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析受試者的硝苯地平血藥濃度。樣品在進(jìn)行LC-MS/MS分析前需要進(jìn)行預(yù)處理。
　　5.藥動(dòng)學(xué)參數(shù)求算及統(tǒng)計(jì)分析Cmax（峰濃度）和Tmax（達(dá)峰時(shí)間）可從藥時(shí)曲線直接讀出，AUC計(jì)算采用梯形法，T1/2用3p97軟件計(jì)算。采

6、用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。不同基因型之間藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的比較采用單因素方差分析。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.硝苯地平血漿藥物濃度測定的方法學(xué)考察
　　標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.101x+0.00155，回歸系數(shù)r2=0.9991，線性范圍0.5-250ng/ml，最低檢測限為0.5ng/ml;平均回收率為97.9％，日內(nèi)、日間變異范圍均小于15％，樣品穩(wěn)定性良好。方法準(zhǔn)確度、靈敏度、穩(wěn)定性均符合生物樣品

7、分析要求。
　　2.POR*28基因多態(tài)性對硝苯地平藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響
　　POR*28CC、CT、TT基因型組的AUC0-∞分別為2425.78±924.92、1854.97±397.38和2256.42±852.22ng.h/ml，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，CC組明顯高于CT組，三組之間具有顯著性差異(P=0.045);AUC0-48h分別為2168.86±777.82、1810.01±404.95和2232.20±675.33ng

8、.h/ml，三組間無顯著性差異(P=0.130);Cmax和Tmax在三組中分別為207.83±82.37、170.91±69.89和134.39±36.37ng/ml和4.32±1.20、3.71±1.28h和2.80±0.45h，三組間均無顯著性差異(P=0.064和P=0.053);CL/F和t1/2在三組中分別為0.045±0.021、0.058±0.015和0.042±0.018L/h和6.41±0.81、8.21±2.29和

9、9.29±3.82h，三組間均有顯著性差異(P=0.034和P=0.032)。
　　3.MDR1基因多態(tài)性對硝苯地平藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響
　　MDR1三種基因型組中，TT組比CC組AUC0-∞增加了46.34％，分別為3252.08ng.h/mL和2222.24ng·h/mL，但無顯著性差異(P=0.066)，其他藥動(dòng)學(xué)參數(shù)也未發(fā)現(xiàn)有顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　POR*28突變降低了硝苯地平的體內(nèi)代謝速率，導(dǎo)致突變