慶大霉素-富血小板凝膠治療感染性骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 骨修復(fù)是一個(gè)復(fù)雜的過程，生長(zhǎng)因子在骨修復(fù)中有著重要的作用[1]。富血小板血漿(PRP)是自體血小板的濃縮體，具有制備簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉、自體、無毒、無免疫原性的優(yōu)點(diǎn)，而且PRP中釋放的多種生長(zhǎng)因子可能符合人體生長(zhǎng)因子的配比，因此PRP被視為較為理想的符合臨床應(yīng)用需要的生長(zhǎng)因子來源。 防治創(chuàng)傷后骨與軟組織感染是一個(gè)較棘手的問題。常規(guī)處理是清創(chuàng)術(shù)后全身應(yīng)用廣譜抗生素，在開放性骨折中，由于血運(yùn)障礙、骨與軟組織失活，全身應(yīng)用

2、抗生素時(shí)，骨折局部抗生素濃度往往低于血藥濃度，療效較差而副作用大。局部應(yīng)用抗生素可在局部獲得較高藥物濃度，同時(shí)保持較低的血藥濃度，增強(qiáng)殺菌作用而減少抗生素毒副作用。 本研究通過體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物感染性骨缺損模型初步探討是否能將PRP與抗生素復(fù)合，利用二者的優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到促進(jìn)骨折愈合和抗感染的作用。 方法： 1、對(duì)比不同離心條件對(duì)PRP制備影響，確定PRP理想制備條件．取健康白兔四只，雌雄不限，體重3—3.5Kg。用預(yù)置抗

3、凝劑的真空采血管由耳背中央動(dòng)脈抽血，按照一定條件離心。用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定離心液中血小板濃度，找到一個(gè)相對(duì)低速、短時(shí)的離心條件，并使PRP達(dá)到5—6倍濃縮率。 2、使用凝血酶—鈣劑激活血小板，制備富血小板凝膠和慶大霉素—富血小板凝膠，PBS液室溫培養(yǎng)，用ELISA試劑盒測(cè)定、比較不同時(shí)點(diǎn)培養(yǎng)液中PDGF，TGF量，判定復(fù)合抗生素后是否影響PRP生長(zhǎng)因子的釋放；用紫外分光光度法測(cè)定不同時(shí)點(diǎn)培養(yǎng)液中慶大霉素含量，判定載藥凝膠是否

4、有緩釋作用。 3、參照沈霖的慢性骨髓炎造模方法，使用金黃色葡萄球菌建立兔脛骨慢性骨髓炎模型，對(duì)以建立的模型手術(shù)清創(chuàng)，植入富血小板凝膠或慶大霉素—富血小板凝膠，并同空白對(duì)照比較，肉眼觀察比較一般狀況，X—ray檢查，病理學(xué)檢查，判定骨缺損愈合情況 結(jié)果： 1、初次離心使紅細(xì)胞與富含血小板的血漿分離，B4、C2的血小板收集率回收率均>80％；再次離心使血小板充分沉淀于離心管的底部，上清液為PPP，棄去大部分PPP，得

5、到約0.5mlPRP，K2和K3條件下血小板濃縮率達(dá)到六倍以上。 2、PRP在凝血酶和CaCl2的作用下活化并形成凝膠，釋放PGDF和TGF，添加慶大霉素對(duì)這兩種生長(zhǎng)因子的釋放沒有明顯影響。 3、慶大霉素—富血小板凝膠在體外環(huán)境下可以持續(xù)釋放慶大霉素超過兩周，第二天釋放達(dá)到峰值，而后逐漸下降，在第14天，釋放濃度仍可以達(dá)到16ug/ml。 4、PRG治療側(cè)的感染性骨缺損在術(shù)后六周沒有愈合，應(yīng)有慶大霉素—富血小板凝

6、膠的一側(cè)骨缺損已經(jīng)基本愈合。 結(jié)論： 1、二次離心法，初次離心條件：1400rpm，10min，再次離心條件：1400rpm，15min可穩(wěn)定獲得濃縮率大于6倍的PRP，是實(shí)驗(yàn)研究PRP時(shí)的理想制備條件。 2、富血小板凝膠和慶大霉素．富血小板凝膠的生長(zhǎng)因子釋放無明顯差異； 3、富血小板凝膠具有緩釋作用，PDGF、TGF、慶大霉素可持續(xù)釋放超過7天。 4、慶大霉素—富血小板凝膠能夠有效地促進(jìn)兔脛骨感