1,5-脫水山梨醇的測定及其應(yīng)用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的:近年來,越來越多的人為糖尿病所折磨,糖尿病已經(jīng)成為威脅人類健康的主要疾病之一,這引起了人們的極大關(guān)注。但是,遺憾的是,人類目前尚不能治愈這種疾病。因此,糖尿病作為一種慢性病,早預(yù)防,早診斷,早治療,對于糖尿病患者的預(yù)后來說尤其重要。為適應(yīng)這種要求,我們開展了糖尿病早期診斷試劑盒的研制與開發(fā)。而1,5-脫水-D-山梨醇是一種存在于人類血液中的正?;衔?,由于其代謝穩(wěn)定,在血液中波動范圍小,可及時反應(yīng)血糖的短期變化,具有空腹血糖

2、、果糖胺和糖化血紅蛋白所不具有的特征,在糖尿病的診斷與治療中很有價值,值得臨床推廣和應(yīng)用。 方法:由于本試劑盒的前半部分已經(jīng)完成,本研究為糖尿病早期診斷試劑盒的研制與開發(fā)的后期實驗部分,本試驗擬計劃包括五部分來完成: 一、已糖激酶底物特異性實驗研究,應(yīng)用相同的己糖激酶偶聯(lián)6-磷酸葡萄糖脫氫酶試劑對3種濃度的12種糖進行催化特異性實驗; 二、葡萄糖脫氫酶底物特異性實驗研究,應(yīng)用相同的葡萄糖脫氫酶試劑和固定參數(shù)對12

3、種糖類物質(zhì)進行催化率實驗研究; 三、吡喃糖氧化酶底物特異性實驗研究,應(yīng)用相同的吡喃糖氧化酶試劑和固定參數(shù)對12種糖類物質(zhì)、甘油和乙二醇等進行催化率實驗研究; 四、葡萄糖清除實驗研究,首先用已糖激酶將樣品中內(nèi)源性的葡萄糖轉(zhuǎn)化為毗喃糖氧化酶(PROD)無催化作用的6-磷酸葡萄糖,然后用葡萄糖氧化酶檢測樣品中葡萄糖的殘留情況; 五、1,5-脫水-D-山梨醇檢測方法的建立與臨床應(yīng)用,使用已經(jīng)建立的血清1,5-脫水-D-山

4、梨醇檢測方法對86例健康人、134例糖耐量異常病人和106例非胰島素依賴型糖尿病患者進行檢測。 結(jié)果: 一、將其對葡萄糖的催化作用定為100%時,已糖激酶/葡萄糖6磷酸脫氫酶試劑對山梨糖、甘露醇無催化活性;對山梨醇幾乎無催化活性(0.01%);對果糖,(0.59%)和木糖(0.54%)有極弱的催化活性;對半乳糖和1,5-脫水-D-山梨醇的催化活性分別為1.80%和1.24%;對乳糖無催化活性,對蔗糖和纖維二糖幾乎無催化活

5、性,對麥芽糖則有平均2.55%的催化活性。 二、將其對葡萄糖的催化作用定為100%時,葡萄糖脫氫酶對單糖中的半乳糖催化率最高可以達到17.13%,其次是木糖,可以達到8.27%,對1.5-脫水-D-山梨醇的催化作用則很弱,僅為1.51%,對果糖、山梨糖、甘露醇、山梨醇則幾乎無催化作用;葡萄糖脫氫酶對雙糖中的乳糖的催化率可以達到17.93%,對纖維二糖和麥芽糖的催化作用很低,兩者分別為2.63%和1.80%,對蔗糖則幾乎沒有催化作

6、用,僅為0.39%。 三、將其對葡萄糖的催化作用定為100%時,吡喃糖氧化酶對單糖中的山梨糖催化率最高可以達到87.51%,其次是木糖(83.17%)和1,5-脫水-D-山梨醇(82.32%),半乳糖為40.69%,對果糖、甘梨醇、山梨醇幾乎無催化作用;吡喃糖氧化酶對雙糖中的麥芽糖催化率為3.19%,對乳糖、蔗糖、纖維二糖幾乎無催化作用;對同等濃度的非糖類物質(zhì)甘油和乙二醇的催化作用也很小,但是對于高濃度的甘油和乙二醇(應(yīng)用濃度在

7、2.2~3.3%)催化活性則很高。 四、本方法可將樣品中高達60mmol/L,即10.8g/L的葡萄糖完全轉(zhuǎn)化。 五、1,5-脫水-D-山梨醇水平在86例正常人(106.1±59.9)和134例糖耐量異常患者(49.4±40.1)及106例非胰島素依賴型糖尿病患者(9.6±11.6)之間差異具有顯著性意義(P<0.001),糖尿病患者的血清1,5-脫水-D-山梨醇水平明顯降低。 結(jié)論: 一、在建立新的檢測

8、方法前要對酶的底物催化特異性進行評價。 二、應(yīng)用葡萄糖脫氫酶建立葡萄糖測定方法前應(yīng)做葡萄糖脫氫酶的糖底物特異性催化實驗研究。 三、建立1,5-脫水-D-山梨醇測定方法前應(yīng)做吡喃糖氧化酶對不同糖底物、甘油和乙二醇的特異性催化實驗研究。 四、由于吡喃糖氧化酶底物催化特異性不好,在測定1,5-脫水-D-山梨醇前,必須先清除樣品中的葡萄糖,以避免干擾樣本中1,5-脫水-D-山梨醇的測定。 五、1,5-脫水-D-山

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