Ⅱ型膠原誘導關節(jié)炎大鼠模型的制備、評價及部分機制的研究.pdf

1、目的：在雞胸骨劍突軟骨中提取、純化II型膠原蛋白(C II)并進行初步鑒定，為制備膠原誘導性關節(jié)炎(CIA)大鼠模型提供原材料；制備CIA大鼠模型，從形態(tài)學、免疫學及病理組織學等多角度觀察CIA大鼠模型特點；進一步闡明CIA大鼠的發(fā)病機制。 方法和結果：1.Ⅱ型膠原蛋白(coIIagen typeⅡ，CⅡ)的提取、純化與鑒定以雞胸骨劍突軟骨為原料，采用胃蛋白酶消化法在酸性條件下提取C II；運用鹽酸胍抽提，NaCl的反復鹽析純

2、化，DEAE.52纖維樹脂處理，透析除鹽等方法去除蛋白多糖、CII降解片段及變性產物以純化CII；采用SDS-PAGE電泳和吸收光譜分析的方法鑒定。實驗結果顯示，所提取的C II與標準品分子量一致，最大吸收峰為226nm，證實所提取純化的蛋白為II型膠原。 2.膠原誘導性關節(jié)炎大鼠(coIIagen-induced arthritis，CIA)模型的制備及評價。本實驗室自提CII加完全弗氏佐劑(CFA)采用皮內注射的方法建立大鼠CIA模

3、型。容積法檢測大鼠足爪腫脹度并進行評分；HE染色法對關節(jié)組織作病理檢查；EL,ISA法檢測體內抗C1I抗體的含量；放免法檢測血清細胞因子IL-1β,TNF-α含量。結果顯示，CIA大鼠足爪的炎癥反應強烈，關節(jié)腫脹明顯；病理檢查關節(jié)組織可見大量炎性細胞浸潤，并伴有組織纖維化；血清中抗C II抗體水平和IL.16、TNF-α顯著升高，提示膠原性關節(jié)炎大鼠模型制備成功。 3.膠原誘導性關節(jié)炎大鼠部分機制的研究在CIA大鼠模型制備成功的基礎上，

4、用MTT法檢測脾淋巴細胞增殖反應；RT-PCR法檢測CIA大鼠脾組織調節(jié)性T細胞的特異性標志物--Foxp3及其表面的TGF-β1的表達。結果顯示，CIA大鼠體內脾淋巴細胞增殖反應增強；Foxp3mRNA與TGF-β1 mRNA表達均降低。 結論：1.所提取純化的蛋白為II型膠原，該方法提純C II簡單，高效。2.制備的CIA大鼠模型其臨床表現、免疫學及病理學改變均與人類RA相似，模型制備成功。3.在CIA模型中，淋巴細胞增減