重組TACI-Ig融合蛋白對(duì)小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎的治療作用和部分機(jī)制.pdf

1、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種涉及T、B淋巴細(xì)胞以及多種致病因素的系統(tǒng)性自身免疫病。B淋巴細(xì)胞刺激因子(Blymphocytestimulator,BLyS)對(duì)B淋巴細(xì)胞的成熟和存活起重要作用。大量研究證實(shí),BLyS的過(guò)表達(dá)與RA等自身免疫病的發(fā)病機(jī)理和疾病進(jìn)程有密切聯(lián)系,RA病人的血清和關(guān)節(jié)滑液中都存在高表達(dá)的BLyS,且關(guān)節(jié)滑液中BLyS的水平高于血清?？缒ぜせ?、鈣調(diào)和親環(huán)素配體相互作用因子(tr

2、ansmembraneactivatorandcalciummodulatorcyclophilinligandinteractor,TACI)是BLyS的受體之一,被發(fā)現(xiàn)表達(dá)于B淋巴細(xì)胞和活化的T淋巴細(xì)胞。BLyS受體TACI融合蛋白(TACI-immunoglobulin,TACI-Ig)是由TACI受體的胞外部分和人免疫球蛋白IgG的Fc段連接而成,它能競(jìng)爭(zhēng)性地與BLyS結(jié)合,阻斷BLyS所介導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞激活。本課題在建立DBA

3、/1小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎(collageninducedarthritis,CIA)模型的基礎(chǔ)上,研究了TACI-Ig對(duì)小鼠CIA的治療作用,并對(duì)其部分機(jī)制進(jìn)行了探討。
　　目的:
　　初步探索TACI-Ig對(duì)小鼠CIA的治療作用及有效劑量,并進(jìn)一步研究TACI-Ig治療小鼠CIA的作用特點(diǎn)及部分機(jī)制。
　　方法:
　　在建立CⅡ誘導(dǎo)的DBA/1小鼠CIA模型基礎(chǔ)上,對(duì)CIA小鼠進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分;足爪X線(xiàn)檢查;關(guān)節(jié)

4、和脾臟的病理檢查及病理學(xué)評(píng)分;胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)測(cè)定;3H-TdR摻入法檢測(cè)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng);ELISA法檢測(cè)血清中細(xì)胞因子BLyS和抗體IgA、IgM的水平;免疫組化法檢測(cè)小鼠脾臟中CD20的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定小鼠脾臟CD19+、CD19+IgD+、CD19+CD27+、CD19+IgM+、CD19+CD21+和CD19+CD23+細(xì)胞的百分含量;流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定小鼠胸腺CD3+CD4+、CD4+CD154+、CD4+C

5、D25+、CD4+CD69+和CD4+CD62L+細(xì)胞的百分含量;使用Transwell細(xì)胞隔離培養(yǎng)體系共培養(yǎng)CIA小鼠B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞后,MTT法檢測(cè)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　1.TACI-Ig治療小鼠CIA的有效劑量探索
　　TACI-Ig(3.333、10和30mg/kg,腹腔注射,每周三次,給藥六周)可不同程度地降低CIA小鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù),改善CIA小鼠足爪放射學(xué)改變以及關(guān)節(jié)和脾臟的

6、病理變化,降低CIA小鼠增高的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),抑制CIA小鼠增強(qiáng)的B和T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),以及降低CIA小鼠血清中高水平的BLyS;TACI-Ig(10mg/kg)和TACI-Ig(30mg/kg)兩組之間無(wú)顯著性差異。TACI-Ig(1.105mg/kg)只能降低CIA小鼠血清中的BLyS水平,而TACI-Ig(0.35mg/kg)對(duì)上述指標(biāo)都沒(méi)有明顯影響。這表明TACI-Ig對(duì)小鼠CIA有治療作用,其最佳劑量范圍主要在3.333

7、-10mg/kg,為進(jìn)一步研究TACI-Ig對(duì)小鼠CIA的治療作用特點(diǎn)和作用機(jī)制提供劑量范圍。
　　2.TACI-Ig對(duì)小鼠CIA的治療作用特點(diǎn)
　　TACI-Ig(3和9mg/kg,皮下注射,每周三次,給藥六周)可明顯降低CIA小鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù);降低CIA小鼠關(guān)節(jié)滑膜組織增生、細(xì)胞浸潤(rùn)、血管翳形成、炎癥和骨質(zhì)侵蝕評(píng)分;降低CIA小鼠脾臟動(dòng)脈周?chē)馨颓始?xì)胞密度、淋巴濾泡增生、邊緣區(qū)細(xì)胞密度和紅髓充血評(píng)分以及生發(fā)中心數(shù)量。TAC

8、I-Ig(1mg/kg)只降低關(guān)節(jié)滑膜組織增生、細(xì)胞浸潤(rùn)、血管翳形成、炎癥評(píng)分,和脾臟動(dòng)脈周?chē)馨颓始?xì)胞密度評(píng)分。各用藥組對(duì)CIA小鼠下降的體重?zé)o明顯影響。
　　3.TACI-Ig能抑制CIA小鼠B、T淋巴細(xì)胞功能,并調(diào)節(jié)CIA小鼠B、T淋巴細(xì)胞亞群的變化
　　TACI-Ig(1、3和9mg/kg,皮下注射,每周三次,給藥六周)可以降低CIA小鼠的胸腺指數(shù),降低脾臟CD19+、CD19+IgD+、CD19+IgM+和CD19

9、+CD21+細(xì)胞的百分含量,降低胸腺CD4+CD69+和CD4+CD154+的細(xì)胞百分含量,升高CD4+CD62L+的細(xì)胞百分含量;TACI-Ig(3和9mg/kg)可以降低CIA小鼠的脾臟指數(shù),降低CIA小鼠B、T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),降低血清BLyS和IgA水平,抑制CIA小鼠脾臟中CD20的表達(dá),降低CD19+CD23+細(xì)胞的百分含量;只有TACI-Ig(9mg/kg)可以降低CIA小鼠的血清IgM水平,降低CD4+CD25+的細(xì)胞百

10、分含量;但各劑量組對(duì)CD19+CD27+和CD3+CD4+的細(xì)胞百分含量沒(méi)有明顯影響。TACI-Ig(100μg/ml)體外用藥,能夠抑制CIA小鼠B、T淋巴細(xì)胞間的相互促進(jìn)對(duì)方增殖的作用。這表明TACI-Ig治療小鼠CIA的作用機(jī)制可能與抑制CIA小鼠B、T淋巴細(xì)胞功能,調(diào)節(jié)CIA小鼠B、T淋巴細(xì)胞亞群有關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.TACI-Ig對(duì)小鼠CIA有治療作用,其最佳劑量范圍主要在3.333-10mg/kg。