血吸蟲感染誘導的Th免疫偏移對小鼠膠原性關節(jié)炎的影響.pdf

1、目的：
　　機體接觸包括蠕蟲在內的病源微生物機會減少,尤其在幼年時期免疫系統(tǒng)失去病源微生物的塑造和協(xié)調,是導致西方發(fā)達國家自身免疫性疾病和過敏性疾病發(fā)病率迅速增高的主要原因之一。蠕蟲感染能激發(fā)強烈的Th2免疫應答,可以改善Th1介導的自身免疫性疾病的臨床癥狀和病理過程。日益增多的流行病學及實驗研究證實了蠕蟲對自身免疫性疾病及過敏性疾病的保護作用,顯示了優(yōu)異的臨床應用價值。目前利用豬鞭蟲卵治療炎癥性腸病(inflammatory b

2、owel disease,IBD)患者已取得良好的臨床效果。
　　類風濕性關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種嚴重危害人類健康的慢性自身免疫性疾病,該病發(fā)病率和致殘率高,目前仍無有效的治療方法。研究表明,CD4+效應T細胞和調節(jié)性T細胞免疫失衡參與RA發(fā)病的各個環(huán)節(jié),RA的致病與Th1/Th17密切相關。日本血吸蟲感染可誘導強烈的Th2優(yōu)勢應答。本研究試圖利用血吸蟲感染和血吸蟲抗原誘導的Th2免疫偏移來恢

3、復RA失衡的Th免疫應答。用CIA鼠構建血吸蟲感染的RA模型,觀察CD4+T細胞亞群的網絡調節(jié),探討RA的發(fā)病、轉歸及免疫抑制性的治療作用。為篩選特異性抑制RA過度的Th1/Th17免疫應答的新型免疫調節(jié)劑奠定基礎。
　　方法:
　　建立雄性DBA/1小鼠膠原性關節(jié)炎(Collagen Induced-arthritis,CIA)模型,分別用單、雙性日本血吸蟲尾蚴(25±2條)于造模前2W、造模后4W(關節(jié)炎模型建立后)經腹

4、部皮膚感染小鼠, SPF級環(huán)境飼養(yǎng),關節(jié)炎指數(shù)評價多發(fā)性關節(jié)炎病變的發(fā)生及嚴重程度。12W后處死動物,ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清膠原特異IgG、IgG1、IgG2a水平,比較血吸蟲干預對CIA鼠自身抗體形成的影響;流式細胞術(flow cytometry,FCM)檢測脾淋巴細胞CD4+T細胞亞群,分析血吸蟲感染對T細胞免疫應答的作用;Real time PCR檢測

5、炎癥關節(jié)內部細胞因子mRNA表達水平;取足爪組織觀察血吸蟲感染對小鼠關節(jié)炎組織病理學的影響;評價血吸蟲活蟲感染對自身免疫性關節(jié)炎小鼠的免疫調節(jié)作用。
　　結果:
　　與對照組相比,預先感染日本血吸蟲尾蚴顯著減輕小鼠關節(jié)炎的病情,降低關節(jié)炎的發(fā)病率,改善病理損害;血清中膠原特異性IgG、IgG2a顯著降低,IgG1水平升高;脾淋巴細胞應對多克隆及抗原特異性刺激誘發(fā)的增殖反應明顯降低;日本血吸蟲感染顯著抑制CIA小鼠IFN-γ+

6、CD4+T細胞比例,提高IL-4+CD4+T細胞百分比。僅在雙性感染的CIA鼠發(fā)現(xiàn)CD25highCD4+Treg(regulatory T cells,Treg)的增殖及IL-17+CD4+T細胞的抑制。血吸蟲感染顯著降低了脾細胞培養(yǎng)上清中INF-γ、TNF-α、IL-1β和IL-6的表達水平,提高IL-10表達。此外,血吸蟲感染顯著上調炎癥關節(jié)內部炎癥因子及NF-κB配體-受體活化因子(receptor activator of N

7、F-κB ligand,RANKL)的表達。對于已經建立的感染模型并出現(xiàn)明顯臨床癥狀的CIA小鼠,感染血吸蟲尾蚴不僅不能改善病情,反而加重病情。
　　結論:
　　日本血吸蟲預先感染誘導的Th2優(yōu)勢應答可顯著抑制CIA異常的Th1應答,減少炎癥介質的釋放,減輕病情,改善病理損害;雙性感染還可上調Treg,抑制CIA小鼠過度的Th17應答。血吸蟲感染對CIA的保護作用依賴于Th2優(yōu)勢應答的預先建立,使異種Ⅱ型膠原不能有效啟動致病