白芍總苷治療大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎的作用及其與調(diào)節(jié)滑膜細(xì)胞MAPKs信號和G蛋白功能的關(guān)系.pdf

1、目的：根據(jù)大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen-inducedarthritis，CIA)的關(guān)節(jié)局部腫脹、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、體重及病理形態(tài)等的改變，明確白芍總苷(totalglucosidesofpaeony，TGP)對CIA大鼠的治療作用；針對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，RA)是一種滑膜細(xì)胞類腫瘤樣增生為病理特點(diǎn)的自身免疫性疾病，從滑膜細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)以及免疫功能等方面，研究TGP對CIA大鼠治療作用可能

2、的環(huán)節(jié)；闡明炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)刺激在CIA大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-likesynoviocytes，F(xiàn)LS)經(jīng)G蛋白偶聯(lián)和MAPKs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑引起FLS過度增殖，分析TGP治療CIA、抑制滑膜細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。 方法：大鼠足趾、尾根部、背部皮內(nèi)多點(diǎn)注射雞Ⅱ型膠原(chickentypeⅡcollagen，CCⅡ)乳劑制備CIA模型，TGP(25、50、

3、100mg·kg-1·d-1)灌胃給藥(intragastricadministration，ig)(d14～d28)，觀察大鼠全身狀況，進(jìn)行多發(fā)性關(guān)節(jié)炎評分，光學(xué)顯微鏡觀察關(guān)節(jié)病理變化；MTT法檢測胸腺T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)及滑膜細(xì)胞的增殖反應(yīng)；免疫組織化學(xué)法檢測滑膜組織Bcl-2、Bax表達(dá)及TUNEL染色檢測滑膜細(xì)胞的凋亡；Westernblot檢測ERK、JNK和P38磷酸化水平，放射自顯影檢測G蛋白核糖基化水平。 結(jié)果：1

4、.TGP對CIA大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)病理及免疫功能的影響CIA大鼠致敏后14d左右出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)較高，表現(xiàn)為對側(cè)和前肢足爪腫脹，耳、尾出現(xiàn)炎性結(jié)節(jié)和紅斑并伴有體重下降。與正常大鼠相比，光鏡下可見CIA模型組大鼠的滑膜組織中滑膜細(xì)胞增生明顯，層次增多，排列紊亂，滑膜下層纖維組織增生，炎性細(xì)胞浸潤及血管翳形成，軟骨中炎性細(xì)胞浸潤，破壞軟骨組織，同時還可見滑膜細(xì)胞的脂肪變性。TGP(25、50、100mg·kg-1，d14～

5、28)治療組均可不同程度改善以上變化，同時對由ConA誘導(dǎo)的CIA大鼠胸腺T淋巴細(xì)胞低下的增殖反應(yīng)有明顯的促進(jìn)作用。 2.TGP對CIA大鼠滑膜細(xì)胞增殖與凋亡的影響CIA大鼠表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞增殖功能亢進(jìn)，TGP(25、50、100mg·kg-1，d14～28)治療給藥可顯著降低CIA大鼠的滑膜細(xì)胞增殖反應(yīng)，同時降低滑膜組織Bcl-2、增加Bax蛋白的表達(dá)，降低Bcl-2與Bax的比例。模擬體內(nèi)環(huán)境體外用炎癥細(xì)胞因子IL-1β刺激滑

6、膜細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-1β能顯著刺激FLS增殖，而不同濃度的TGP(2.5、12.5、62.5、312.5mg·L-1)體外給藥均能抑制IL-1β誘導(dǎo)的滑膜細(xì)胞增殖反應(yīng)，促進(jìn)滑膜細(xì)胞的凋亡。結(jié)合體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，表明TGP可能通過抑制滑膜細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡從而起到對CIA大鼠的治療作用。 3.TGP對CIA大鼠滑膜細(xì)胞MAPKs信號的影響TGP(25、50、100mg·kg-1，d14～28)均可不同程度抑制CIA大鼠滑膜組織的MAP

7、Ks磷酸化水平；體外給藥也能抑制由IL-1β誘導(dǎo)的FLSERK1/2的磷酸化水平。這一結(jié)果表明抑制CIA大鼠滑膜細(xì)胞MAPKs信號分子是TGP發(fā)揮抑制滑膜細(xì)胞增生、改善關(guān)節(jié)炎癥狀的主要機(jī)制之一。 4·TGP對IL-1β誘導(dǎo)的FLSG蛋白核糖基化的影響TGP體外給藥(2.5、12.5、62.5mg·L-1)可降低由IL-1β刺激的FLS中PT催化的ADP-核糖基化水平，同時升高由CT催化的ADP-核糖基化水平。提示CIA大鼠滑膜細(xì)

8、胞G蛋白功能出現(xiàn)失調(diào)，TGP可以通過降低Gαi、升高Gαs功能，調(diào)節(jié)滑膜細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。 結(jié)論：1·TGP對大鼠CIA多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)局部腫脹及病理形態(tài)等具有明顯的改善作用，恢復(fù)異常的免疫功能，抑制滑膜細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡。 2·TGP不同程度抑制大鼠CIA滑膜組織的MAPKs磷酸化及抑制由IL-1β誘導(dǎo)的ERK1/2的磷酸化水平，恢復(fù)由IL-1β介導(dǎo)的滑膜細(xì)胞Gαi、Gαs蛋白功能的平衡，可能是TGP抑制滑膜