CCNG2在腦膠質瘤中的表達及與化療關系的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、膠質瘤(Glioma)是包涵星形膠質細胞腫瘤、少突膠質細胞腫瘤和室管膜細胞腫瘤等不同細胞類型和不同病理等級的一類神經(jīng)外胚層腫瘤。在全球每年新增的中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)腫瘤中,腦膠質瘤最為常見。盡管在手術和放射治療方面已經(jīng)取得進步,但總體預后仍然較差。近年來化療在惡性膠質瘤的治療中逐步受到重視,患者對于化療的敏感性及耐藥性的差異目前成為研究的重點?;蛐酒芯繛榉治龊Y選差異表達基因提供了有效的技術手段,分析驗證基因芯片結果并從中找出真正有臨床意

2、義者需對每個基因以及其相關通路和蛋白進行深入的研究。我科教授對長征醫(yī)院手術治療并行基因芯片檢測的膠質瘤病例長期隨訪,分析芯片數(shù)據(jù),依據(jù)疾病與相關基因數(shù)據(jù)庫,通過生物信息學技術篩選出化療相關的差異表達基因20余條,細胞周期蛋白G2(Cyelin G2,CCNG2)即是其中之一。細胞周期蛋白G2主要作用是阻滯細胞周期進程。越來越多的證據(jù)提示CCNG2基因可能是一個重要的抑癌基因,抑制腫瘤細胞增殖,并參與部分腫瘤化療的生物學過程。目前CCNG

3、2在膠質瘤中的研究鮮有報道。為了了解CCNG2在人腦膠質瘤組織中的表達情況,及其與患者病理及預后等臨床特征的關系,本實驗通過研究臨床病例組織中及TMZ、VM26化療藥物處理前后CCNG2mRNA和蛋白表達水平的變化,并利用重組CCNG2慢病毒載體轉染U251細胞株研究U251細胞細胞周期及對化療藥物敏感性受CCNG2過表達的影響變化,從而初步探討CCNG2在膠質瘤發(fā)生發(fā)展及化療藥物作用等生物學機制中所起作用。本實驗共分為兩個部分:

4、>   第一部分、CCNG2在腦膠質瘤組織中的表達及臨床意義的研究
   目的:比較CCNG2在不同WHO病理級別腦膠質瘤組織中表達水平的差異性,并分析CCNG2表達水平差異與膠質瘤患者預后的關系。
   方法: qRT—PCR檢測CCNG2 mRNA在不同等級腦膠質瘤組織的表達水平。并分析其mRNA轉錄水平的差異性與膠質瘤病理級別的相關性。免疫組化染色檢測不同級別腦膠質瘤石蠟標本中CCNG2蛋白表達情況。隨訪患者生存

5、時間,利用Kaplan—Meier及Cox生存分析檢驗CCNG2表達水平同患者預后的關系。
   結果: CCNG2在高級別(WHOⅢ—Ⅳ級)膠質瘤組織中mRNA轉錄水平明顯下調,與低級別(WHOⅠ—Ⅲ級)膠質瘤相比差別顯著(P<0.05)。免疫組化法檢測了腦膠質瘤CCNG2的蛋白表達情況。在腦膠質瘤細胞胞質中可見CCNG2蛋白染色,而且不同病理級別腦膠質瘤的CCNG2的表達差異顯著,高級別膠質瘤組織陽性率低于低級別組(P<0.

6、05)。Kaplan—Meier生存曲線分析71例星形膠質瘤患者生存期,提示CCNG2高表達患者預后好于低表達者,Cox分析提示CCNG2表達水平可作為膠質瘤患者的獨立預后判斷因素(p<0.05)。
   結論:CCNG2在腦膠質細胞瘤存在陽性表達,低級別腦膠質瘤中CCNG2表達水平明顯高于高級組。CCNG2蛋白染色陽性的膠質瘤患者的預后較好。
   第二部分、CCNG2過表達對U251細胞株細胞周期的影響及與化療關系的

7、實驗研究
   目的:研究和探討過表達CCNG2對U251細胞化療敏感性的影響。
   方法:應用CCNG2慢病毒載體、空載體分別轉染體外培養(yǎng)的U251人膠質瘤細胞株,正常培養(yǎng)U251細胞作為空白對照。qRT—PCR和Western—blot檢測轉染前后加用化療藥物的U251細胞CCNG2 mRNA和蛋白表達水平的變化情況;流式細胞儀檢測CCNG2過表達的U251細胞株細胞周期分布情況。MTT法(噻唑蘭比色分析法)檢測U

8、251中轉染前后加用化療藥物后細胞增殖生長情況變化。
   結果:與對照組U251細胞和轉染空白載體的U251細胞相比,qRT—PCR和Western blot
   結果顯示,轉染重組CCNG2病毒載體的U251細胞CCNG2 mRNA和蛋白表達水平顯著增加(P<0.05)。流式細胞儀分析細胞周期分布顯示轉染CCNG2病毒載體的U251細胞被抑制在G0/G1期。MTT法檢測細胞增殖率發(fā)現(xiàn),CCNG2過表達的U251細胞

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