山東省乙型血友病患者的基因檢測及分析.pdf

1、目的：
　?、賹?4例乙型血友病患者進行臨床資料調(diào)查及分析，以期了解目前山東省乙型血友病患者治療現(xiàn)狀。
　　②為確診乙型血友病患者的基因突變類型及尋找FⅨ基因突變的規(guī)律，同時分析山東省乙型血友病患者的基因突變譜，為遺傳學咨詢奠定基礎(chǔ)，我們對24例明確診斷的乙型血友病男性患者進行了基因檢測和分析。
　　方法：
　?、俨杉?4例乙型血友病患者的臨床資料，包括性別、年齡、發(fā)病年齡、確診年齡、遺傳史、近半年替代治療頻率等

2、在內(nèi)的基本信息，并進行全面的體格檢查及感染性標志物檢查;
　?、趯?4例乙型血友病患者進行血漿凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C)、血漿凝血因子Ⅸ抗原(FⅨ:Ag)、血漿凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)及凝血常規(guī)檢測，凝血常規(guī)主要包括活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)及纖維蛋白原(FIB)。而后結(jié)合24例乙型血友病患者具體的臨床癥狀明確其表型診斷;
　　③采集24例乙型血友病患者的外周靜脈血，提取基因

3、組DNA;依據(jù)NCBI上GenBank中的FⅨ基因參考序列(GenBank NM_000133.3)，利用Primer Premier5.0軟件設(shè)計8對引物，覆蓋FⅨ基因全部外顯子及其側(cè)翼序列;應(yīng)用PCR技術(shù)擴增24例乙型血友病患者FⅨ基因8個外顯子及其側(cè)翼序列;運用雙脫氧鏈終止法在ABI3730XL測序儀上對PCR擴增產(chǎn)物進行測序;對測序結(jié)果結(jié)合Chromas軟件及BLAST與GenBank中參考序列進行比對，尋找基因變異，確定24例

4、乙型血友病患者FⅨ基因的突變類型。
　　結(jié)果：
　　①24例乙型血友病患者均為重、中型患者，其中重型患者16例(66.7％)，中型患者8例(33.3％)。
　　②對24例乙型血友病患者進行基因檢測共發(fā)現(xiàn)18種基因突變類型，包括錯義突變13種，無義突變2種，缺失突變3種。其中13種突變?yōu)橐褕蟮赖耐蛔冾愋停?種突變類型國際上未見報道。
　?、?種新的突變類型分別為:c.200delA、c.306delT、c.688-

5、690delGGA、c.1025C＜G、C.1157C＜A。
　　結(jié)論：
　　乙型血友病患者臨床表現(xiàn)有明顯異質(zhì)性，主要表現(xiàn)在首次出血年齡、首次關(guān)節(jié)出血年齡、出血頻率、關(guān)節(jié)畸形數(shù)目等方面。FⅨ基因突變是導(dǎo)致乙型血友病的根本原因。對24例乙型血友病患者的FⅨ基因分析表明基因突變具有明顯的異質(zhì)性，且錯義突變?nèi)允悄壳癋Ⅸ基因的主要突變方式。FⅨ基因突變常見的外顯子部位與他們編碼的氨基酸蛋白行使功能時所起的作用有關(guān)。通過基因檢測及分析