鼠疫耶爾森氏菌F1-V基因克隆、表達(dá)、蛋白質(zhì)純化以及免疫保護(hù)性的初步研究.pdf

1、　 本研究從鼠疫耶爾森氏菌EV76標(biāo)準(zhǔn)株中提取細(xì)菌質(zhì)粒，通過PCR的方法擴(kuò)增鼠疫的F1抗原和V抗原，經(jīng)測序分析正確后，將F1抗原片段和V抗原片段克隆到原核表達(dá)載體pET-11c中，構(gòu)建F1-V/pET-11c重組表達(dá)質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)大腸桿菌中，進(jìn)行PCR及雙酶切鑒定，篩選陽性克隆；測序結(jié)果顯示F1基因的堿基序列與Gene-bank(X61996)完全一致，V基因的堿基序列與Gene-bank(M26405)相比在56

2、4bp處有一同義突變；通過IPTG誘導(dǎo)F1-V蛋白表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE檢測表達(dá)產(chǎn)物，重組蛋白在E.coli中獲得了高效表達(dá)，在相對(duì)分子量約58000Dal處出現(xiàn)一條蛋白條帶，經(jīng)薄層掃描分析目的蛋白條帶約占全菌體蛋白的22﹪左右，主要以可溶性蛋白形式存在。通過Western-Blot檢測重組蛋白的免疫原性；免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明，兔抗鼠的多抗血清能夠識(shí)別表達(dá)的F1-V融合蛋白?！　　　?同時(shí)將純化的F1-V融合蛋白用PLGA微球包