cAMP-CREB-CREM通路及調(diào)控在微波輻射致生精細(xì)胞損傷中的作用研究.pdf

1、目的:隨著微波技術(shù)的迅猛發(fā)展,其在日常生活中應(yīng)用越來越廣泛,對人類健康的危害亦日益受到關(guān)注。既往研究發(fā)現(xiàn),睪丸是微波輻射的敏感靶器官之一,但其損傷分子機(jī)制不明確。本課題旨在探討cAMP-CREB/CREM通路及調(diào)控在微波輻射致生精細(xì)胞損傷中的作用,為損傷防治提供思路。
　　方法:90只二級雄性Wistar大鼠和離體培養(yǎng)GC-2spd細(xì)胞經(jīng)0、10和30mW/cm2微波輻射輻射2周(5次/周,15min/次),分別于輻射后6h~28

2、d和1h~24h,采用光鏡、電鏡、精子動態(tài)分析系統(tǒng)、MTT、TUNEL、FCM、ELISA、WesternBlot及圖像分析等儀器和方法,探討微波輻射后生精細(xì)胞的改變,cAMP-CREB/CREM通路信號分子、靶基因及其調(diào)控因子變化在生精細(xì)胞損傷中的作用。
　　結(jié)果:(1)血清睪酮含量于30mW/cm2微波輻射后1～3d明顯降低。(2)10和30mW/cm2微波輻射后1d和7d,睪丸生精細(xì)胞凋亡明顯增加,S期細(xì)胞比例減少;28d內(nèi)

3、見生精細(xì)胞變性、壞死、脫落,多核巨細(xì)胞形成等,超微結(jié)構(gòu)見精原細(xì)胞、Leydig細(xì)胞染色質(zhì)凝集邊移,各級生精細(xì)胞線粒體腫脹,精子頭部形態(tài)異常等。(3)10和30mW/cm2微波輻射后1d、14d和6h~14d,附睪AB級精子比例明顯下降,D或C級精子比例明顯增加,精子活力參數(shù)VAP、BCF和VCL、VSL明顯下降;6h~1d和6h~7d時精子畸形率明顯增加。(4)10和30mW/cm2微波輻射后睪丸組織cAMP含量降低(7～28d),PK

4、A活性升高(3～7d)或降低(14～28d),CREM(6h~1d)和p-CREB(7～14d)表達(dá)明顯下調(diào)。(5)10和30mW/cm2輻射后6h~1d及7d~14d睪丸組織LTESK1和LDH-C表達(dá)均明顯下調(diào)。(6)10和30mW/cm2輻射后6h~28d睪丸組織TORC1表達(dá)明顯上調(diào);1d~7d和28dACT表達(dá)明顯下調(diào)。(7)10和30mW/cm2微波輻射后1～12hGC-2spd細(xì)胞增殖活力降低,輻射后6h細(xì)胞凋亡率明顯增加

5、,超微結(jié)構(gòu)見細(xì)胞染色質(zhì)凝集邊移和細(xì)胞壞死,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張等。(8)10和30mW/cm2微波輻射后GC-2spd細(xì)胞cAMP含量明顯降低(6h和24h),PKA活性明顯下降(10mW/cm26h)或升高(30mW/cm21～24h),CREM表達(dá)明顯下調(diào)(1h和6h)或上調(diào)(24h),p-CREB表達(dá)明顯上調(diào)(10mW/cm21～24h,30mW/cm21～6h)或下調(diào)(30mW/cm224h)。(9)10和30mW/cm2微波輻射后G

6、C-2spd細(xì)胞TESK1表達(dá)明顯上調(diào)(1h)或下調(diào)(6h和24h),LDH-C表達(dá)上調(diào)(1h和6h)或下調(diào)(24h)。(10)10mW/cm2微波輻射后1h和6hGC-2spd細(xì)胞ACT的表達(dá)明顯上調(diào);30mW/cm2輻射后ACT的表達(dá)明顯下調(diào)(1h和24h)或上調(diào)(6h);10和30mW/cm2微波輻射后1h,GC-2spd細(xì)胞TORC的表達(dá)明顯下調(diào);輻射后6h和24h均明顯上調(diào)。
　　結(jié)論:10和30mW/cm2微波輻射:(