bFGF調(diào)控PDGFRα在輻射誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞損傷修復(fù)中的作用及機(jī)制.pdf

1、骨髓屬于輻射高度敏感組織，骨髓造血損傷是輻射損傷的基本表現(xiàn)之一，其中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能損傷是關(guān)鍵。輻射誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能損傷主要表現(xiàn)為增殖、成骨分化抑制，與骨髓成骨細(xì)胞的數(shù)量與造血功能活躍程度密切相關(guān)。因此，修復(fù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，對于快速修復(fù)骨髓造血損傷具有重要意義。堿性成纖維生長因子(basicfibroblast growth factor， bFGF)是近期發(fā)現(xiàn)能提高神經(jīng)干細(xì)胞抗輻射能力的高效安全抗輻射因子，然而bFGF對

2、其他類型干細(xì)胞，尤其是對輻射后人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞損傷修復(fù)中的作用如何，目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。血小板源性生長因子受體α(platelet derivedgrowth factor receptor alpha，PDGFRα)是最近發(fā)現(xiàn)調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、成骨分化的關(guān)鍵蛋白，前期研究發(fā)現(xiàn)bFGF能夠調(diào)控PDGFRα的表達(dá)。為了探討bFGF調(diào)控PDGFRα表達(dá)在輻射誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞損傷過程中發(fā)揮的作用及機(jī)制，本課題采用不同輻射劑量和不同

3、bFGF濃度處理人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，構(gòu)建人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輻射損傷模型和損傷后的bFGF作用模型，通過CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、Western blotting、茜素紅染色等方法檢測輻射和bFGF對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、凋亡、成骨分化的影響，篩選最佳輻射劑量和最適bFGF作用濃度通過Western blotting法探索輻射和bFGF對PDGFRα表達(dá)的影響及機(jī)制。研究結(jié)果如下:
　　1.實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞經(jīng)形態(tài)學(xué)、分化潛能、表面標(biāo)志

4、物三方面鑒定，符合人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞典型特征。
　　2.輻射組間充質(zhì)干細(xì)胞增殖低于未輻射組(P＜0.05)，輻射后間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力損傷，且輻射劑量越大，損傷越嚴(yán)重。
　　3.輻射組人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化標(biāo)志物Runx2水平和鈣結(jié)節(jié)數(shù)低于未輻射組(P＜0.05)，輻射后間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力損傷。
　　4.12Gy劑量以內(nèi)輻射后，無明顯間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡現(xiàn)象出現(xiàn)，僅輻射早期（24小時(shí)）12Gy劑量組出現(xiàn)顯著細(xì)胞凋

5、亡(P＜0.05)。
　　5.添加bFGF作用后，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力修復(fù)(P＜0.05)，但是高濃度20ng/ml bFGF無作用效果(P＞0.05)，5ng/ml修復(fù)作用最明顯。
　　6.添加bFGF作用后，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化標(biāo)志物Runx2表達(dá)和鈣結(jié)節(jié)數(shù)明顯增加（P＜0.05），成骨分化能力修復(fù)。
　　7.PDGFRα表達(dá)水平，輻射處理組明顯低于未輻射組;而添加bFGF作用的輻射組則明顯高于單純輻射