人N端脂多糖結(jié)合蛋白（tLBP）基因的克隆表達及保護作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該課題在已獲得人LBP全長cDNA的基礎(chǔ)上,設(shè)計了擴增tLBP基因的引物,成功克隆到目的基因片段,并順利插入桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFASTBAC以及完成了目的基因的特異轉(zhuǎn)座和病毒重組,成功構(gòu)建了桿狀病毒表達系統(tǒng).應(yīng)用Sf21昆蟲細胞和BAC-TO-BAC桿狀病毒表達系統(tǒng)、TALON金屬鏊合層析等方法表達純化了重組的人N末端脂多糖結(jié)合蛋白cDNA的表達產(chǎn)物,通過Lowry,SDS-PAGE,Western blot及毛細管電泳等方法對表達產(chǎn)物

2、進行生化特性鑒定,經(jīng)體外與LPS結(jié)合及細胞評價活性實驗表明,純化的重組人tLBP蛋白具有與LPS結(jié)合的能力,且在細胞水平顯示出一定的結(jié)合或中和LPS的生物活性.在上述工作工作基礎(chǔ)上,通過對昆明小鼠在內(nèi)毒素LPS致傷與保護劑作用前后的動態(tài)對比觀察,以及對小鼠LPS致死性攻擊與保護的動物死亡率觀察,結(jié)果顯示重組的N端脂多糖結(jié)合蛋白(tLBP)對內(nèi)毒素損害小鼠有一定的保護作用.提示tLBP可能結(jié)合或中和了部分LPS,從而減弱相關(guān)炎性細胞因子和

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