構(gòu)建組織工程化凝膠及體內(nèi)誘導(dǎo)骨壞死血管化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 優(yōu)化兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定
　　目的:為構(gòu)建骨組織工程血管化提供種子細(xì)胞。
　　方法:采用血管內(nèi)膜外翻和膠原酶消化法分離培養(yǎng)兔取主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞并傳代,倒置顯微鏡、透射電鏡觀察和免疫熒光鑒定。
　　結(jié)果:鑒定培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察內(nèi)皮細(xì)胞呈緊密排列、短梭多角形的“鵝卵石”形態(tài),透射電鏡可見內(nèi)皮細(xì)胞特征性 W—P小體,免疫熒光鑒定CD31(+)。

2、
　　結(jié)論:兔血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)成功,且純度高、數(shù)量多、狀態(tài)好。本法可為骨組織工程血管化的研究提供種子細(xì)胞。
　　第二部分 骨內(nèi)注射無水酒精建立兔股骨頭壞死模型
　　背景:股骨頭壞死在青壯年中患病人數(shù)越來越多,它是一個(gè)具有明顯高致殘的疾病。目前缺少可靠的股骨頭壞死動(dòng)物模型來評(píng)價(jià)新的治療方法。
　　目的:這項(xiàng)研究是為了建立合適的股骨頭壞死動(dòng)物模型,它可以評(píng)價(jià)各種方法的療效。方法:X線透視下將新西蘭兔股骨頭中心鉆

3、孔并注入無水酒精。經(jīng)過2,4和6周處死動(dòng)物獲取股骨頭。采用X射線,磁共振成像(MRI)和病理切片進(jìn)行了分析和記錄。結(jié)果:14天后所有的動(dòng)物被證實(shí)了股骨頭部分壞死。股骨頭壞死的形態(tài)學(xué)改變(完整的外觀形態(tài),大體循環(huán)和關(guān)節(jié)軟骨)與人類早期股骨頭壞死是相似的。
　　結(jié)論:建立了良好的股骨頭壞死動(dòng)物模型。它可以用于治療股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究。
　　第三部分 組織工程化凝膠誘導(dǎo)股骨頭壞死血管化的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:早期股骨頭壞死

4、的治療仍是臨床面臨的挑戰(zhàn)。內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞(EC/SMC)已被證明在動(dòng)物模型體內(nèi)促進(jìn)血管和骨再生。嘗試證明:EC/ SMC移植可通過促進(jìn)血管生成和骨再生治療股骨頭壞死。
　　材料與方法:先建立無水酒精誘導(dǎo)兔股骨頭壞死模型,制作出 VEGF和MCP-1的緩釋微球與膠原凝膠和EC/ SMC形成一個(gè)聚合物。然后將這種組織工程聚合物凝膠注射到骨壞死區(qū)域。干預(yù)后第2,4和6周,通過影像學(xué)(X光和磁共振成像)和病理學(xué)(H&E)染色和免疫組

5、化檢測(cè)股骨頭壞死后血管和骨組織再生。使用Image-Pro Plus圖像分析軟件對(duì)新生血管密度,新生血管的直徑和包被平滑肌細(xì)胞的成熟新生血管數(shù)量進(jìn)行分析。利用二樣本均數(shù) T檢驗(yàn),P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:X線檢查,MRI,組織病理學(xué)檢測(cè)顯示骨壞死面積縮小,新生毛細(xì)血管和新生骨修復(fù)壞死區(qū)域。免疫組化顯示 a-SMA(+)的血管形成。圖像軟件定量分析細(xì)胞/微球/凝膠組的新生血管密度,新生血管直徑和a-SMA(+)的血管。