組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶修飾型人源載體的構(gòu)建及其功能研究.pdf

1、1990年，NIH批準(zhǔn)了腺苷脫氨酶缺乏癥的基因治療方案之后，許多研究人員不斷探索對(duì)不同的疾病進(jìn)行基因治療，其中非病毒載體在基因治療中的應(yīng)用越來(lái)越受到重視。我室進(jìn)行人源基因載體的研究已久，前期實(shí)驗(yàn)證明，人源載體能攜帶外源基因在各種細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)。但因?yàn)槿嗽椿蜉d體臂的同源序列位于D、G組染色體的短臂上，有研究表明該區(qū)域染色質(zhì)螺旋化程度比較高，為了進(jìn)一步的提高人源基因載體介導(dǎo)的外源基因的表達(dá)，我們從基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)制入手，認(rèn)識(shí)到基因的轉(zhuǎn)錄

2、除了與基因本身的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列外，還與基因所在的位置和不同程度的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化有關(guān)。 目的：我們將組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶基因連至人源基因載體介導(dǎo)EGFP基因的表達(dá)，以此研究乙?；瘜?duì)人源基因表達(dá)的影響。 方法：通過(guò)構(gòu)建組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶MORF4修飾的三個(gè)人載基因載體phr-hGMBGCEGFP、phr-hGMBCEGFP 及phmeo- hGMBGCEGFP，將這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞Bel-7402，并通過(guò)熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀以及We

3、stern-Blot等方法對(duì)GFP蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)；同時(shí)用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的未經(jīng)乙?；感揎椀娜嗽摧d體phr-chEGFP及商業(yè)化載體pEGFP-N1進(jìn)行比較，來(lái)檢驗(yàn)乙酰化修飾對(duì)人源載體攜帶外源基因表達(dá)的影響。 結(jié)果：熒光顯微鏡觀察及Western—Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)乙酰化修飾的人源載體GFP蛋白的表達(dá)比未經(jīng)乙?；揎椀娜嗽摧d體phr-chEGFP的表達(dá)明顯增強(qiáng)；流式細(xì)胞儀對(duì)GFP蛋白的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)修飾的載體轉(zhuǎn)染效率在原有的基