常見致病真菌性角膜炎小鼠模型的建立.pdf

1、山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文常見致病真菌性角膜炎小鼠模型的建立姓名：王殿強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：謝立信200604012006胼堙研究乍畢竹淪立常見致病真菌性角膜炎小鼠模型的建立山東省眼科研究所研究生：王殿強(qiáng)導(dǎo)師：謝立信教授【摘要J目的真菌性角膜炎是一種嚴(yán)垂的敏直性跟瘸，發(fā)病宰呈明顯上升趨勢(shì)，占感染性眼病的比例逐年增大，近年我國(guó)多地區(qū)統(tǒng)計(jì)顯示真苗性角膜炎已躍居感染性角膜疾病的首位而臨床上對(duì)真菌性角膜炎的處理頗為棘手，缺

2、乏低毒、特異、有效的抗真菌藥物，部分患者在藥物治療期間病情加重，即便手術(shù)治療仍有少數(shù)患者最終喪失眼球，因此，近年來(lái)i幺病已引起眼科醫(yī)生的關(guān)注。探索疾病治療方法首先是進(jìn)行基礎(chǔ)研究，而進(jìn)行基礎(chǔ)研究的基本途徑就是建立杯準(zhǔn)有效的動(dòng)物模型，但是目前報(bào)道的多種方法存在缺少統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)、感染率低、可重復(fù)性不高及依賴糖皮質(zhì)激素等缺點(diǎn)因此本研究探索一種新的方法：改良角膜表層鏡法，在不應(yīng)用糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑的情況下，建立常見致病真菌性角膜炎小鼠模型，以便為

3、進(jìn)一步進(jìn)行基礎(chǔ)研究尤其是免疫學(xué)和分子遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制做準(zhǔn)備，同時(shí)觀察菌絲在小鼠角膜基質(zhì)內(nèi)的生長(zhǎng)方式等特點(diǎn)。方法選取3種臨床常見的致病真菌：茄病鐮刀菌、煙曲霉菌、白色念珠菌，近交系BALB／c小鼠，應(yīng)用改良的角膜表層鏡法，即刮除角膜上皮，大鼠角膜片覆蓋其上，二者層問注入菌液，縫合眼瞼。按菌液濃度和閉臺(tái)跟瞼時(shí)間不同分組對(duì)比研究，拆除眼臉縫線后進(jìn)行裂隙燈檢查，臨床評(píng)分，刮片、組織病理學(xué)檢查及角膜組織定量培養(yǎng)篩選最佳方法結(jié)果(1)白色念珠菌組：菌

4、液濃度1x1曠CFD／m1閉合眼腧49h，小鼠角膜感染率100％，角膜潰瘍重持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)(8天)，PAS染色見大量菌絲，菌絲生長(zhǎng)方式總體上呈垂直生長(zhǎng)趨勢(shì)，浸瀾角膜深基質(zhì)層，甚至穿透角膜進(jìn)入前房，角膜易穿孔，前房炎癥反應(yīng)重。真菌培養(yǎng)陽(yáng)性，定量培養(yǎng)角膜內(nèi)真菌數(shù)量隨時(shí)問推移逐漸減少(2)煙曲霉菌組：菌液濃度l10SCFU／ml，閉合眼瞼72h，小鼠角膜感染率833％，但輕重不等，持續(xù)時(shí)閫長(zhǎng)短不一(4一S天)，且發(fā)現(xiàn)潰瘍呈全板層剝離現(xiàn)象，角膜緣新

5、生血管增生早且迅速，潰瘍自愈傾向明顯，PAS染色見菌絲浸潤(rùn)角膜全層，生長(zhǎng)方式總體上呈垂直生長(zhǎng)趨勢(shì)，真菌培養(yǎng)陽(yáng)性。(3)茄病鑲刀菌組：菌液濃度ixl0SCFI7佃J，閉合跟腧72h，小鼠角膜感染率917％，均為重度感染，持續(xù)時(shí)問長(zhǎng)(8天)，PAS染色見菌絲生長(zhǎng)方式總體上呈垂直生長(zhǎng)趨勢(shì)，且易穿透角膜進(jìn)入前房，甚至穿透晶體囊膜浸潤(rùn)晶體皮質(zhì)。角膜組織定量培養(yǎng)真菌數(shù)量逐漸減織結(jié)構(gòu)、宿主的防御能力及其與真菌毒力的相互抑制劑情況下，改良角膜表層鏡法可