利用不同免疫狀態(tài)小鼠初步探討真菌性角膜炎的發(fā)病機(jī)制.pdf

1、目的：本課題組前期利用免疫活性小鼠研究發(fā)現(xiàn)特異性免疫在真菌性角膜炎(FungalKeratitis;FK)發(fā)病和轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用。本研究利用免疫缺陷小鼠進(jìn)一步探討免疫反應(yīng)在真菌性角膜炎發(fā)病和轉(zhuǎn)歸中的作用。
　　 方法：選用6-8周齡的正常Balb/c鼠和具有相同遺傳背景及相同周齡的裸鼠(T細(xì)胞缺陷),SCID鼠(T、B細(xì)胞缺陷)作為研究對(duì)象,采用基質(zhì)注射方法分別注射1.0μl濃度為1×108CFU/ml的白色念珠菌孢子或煙曲霉

2、菌孢子誘導(dǎo)白色念珠菌性角膜炎或煙曲霉菌性角膜炎。在感染后裂隙燈連續(xù)觀察小鼠角膜臨床特征變化,根據(jù)角膜病變深度、病灶范圍、及表面規(guī)則性進(jìn)行臨床評(píng)分。在感染后1、3、7和14天取小鼠眼球進(jìn)行病理學(xué)檢測(cè),用PAS和HE染色分別觀察小鼠角膜組織中真菌茵絲的生長(zhǎng)和炎性細(xì)胞的浸潤(rùn);用CFU計(jì)數(shù)角膜組織中活菌數(shù)量的變化;ELISA檢測(cè)血漿和角膜組織勻漿液中細(xì)胞因子IL17、IFNγ和IL10的變化;流式細(xì)胞分析各組小鼠脾臟中CD19+和IL10+雙陽(yáng)

3、性細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。
　　 結(jié)果：Balb/c鼠和SCID鼠的生理鹽水對(duì)照組發(fā)生極輕度的炎癥,其感染組都發(fā)生典型的白色念珠菌性角膜炎或煙曲霉菌性角膜炎,兩者平均疾病分?jǐn)?shù)都在感染后第5天達(dá)到最高隨后逐漸降低,并且病理切片染色和CFU檢測(cè)都顯示在感染后1天和3天時(shí)其角膜組織中有大量真菌菌絲生長(zhǎng)及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),在感染后14天時(shí)其角膜組織已無(wú)明顯真菌生長(zhǎng),炎癥趨向恢復(fù)。而相比于Balb/c鼠和SCID鼠發(fā)生典型的FK,同樣進(jìn)行真菌孢子

4、注射的裸鼠則不發(fā)生白念菌性角膜炎或煙曲霉菌性角膜炎,僅表現(xiàn)為輕度炎癥(與正常Balb/c鼠的生理鹽水對(duì)照組類似),至第7天已恢復(fù)正常;并且其角膜組織活菌數(shù)在感染后第1天時(shí)已明顯減少,至第5天已檢測(cè)不到。Balb/c鼠和SCID鼠生理鹽水對(duì)照組的血漿和角膜勻漿液中IL17和IFNγ表現(xiàn)為較低水平且隨時(shí)間無(wú)明顯變化,但裸鼠感染組中IL17都有早期升高并逐漸回落的趨勢(shì),IFNγ/則都表現(xiàn)為感染中后期升高趨勢(shì)。而相比于Balb/c鼠和SCID鼠

5、的FK組,裸鼠相應(yīng)FK組的血漿和角膜勻漿液中IL17和IFNγ都表現(xiàn)為較低水平且無(wú)明顯變化;而IL10則表現(xiàn)為早期較高水平的升高并逐漸回落趨勢(shì);脾臟流式檢測(cè)提示IL10由CD19+細(xì)胞分泌。在Balb/c鼠FK組中IL10表現(xiàn)為早期較低水平的升高并逐漸回落趨勢(shì),在SCID鼠FK組中檢測(cè)不到IL10。
　　 結(jié)論：在不同動(dòng)物誘導(dǎo)FK后對(duì)不同細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)檢測(cè)提示:由非特異性免疫細(xì)胞產(chǎn)生的IL17在真菌性角膜炎的發(fā)病中發(fā)揮重要作用;