腦靈湯對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠海馬CA3區(qū)域Nogo-A和NgR表達(dá)變化的影響.pdf

1、背景和目的：阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變，主要臨床表現(xiàn)為認(rèn)知功能障礙、日常生活能力下降和精神行為癥狀等。其主要病理特征是老年斑(senileplaque，SP)、神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillaryt angles，NFT)、選擇性神經(jīng)元及突觸丟失。隨著我國(guó)人口的老齡化趨勢(shì)，AD發(fā)病率持續(xù)上升。研究發(fā)現(xiàn)65歲的老年人老年性癡呆的發(fā)病率為10％，而85歲以上者約達(dá)

2、30％。然而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病的防治研究至今尚未取得突破性進(jìn)展。目前認(rèn)為β-淀粉樣蛋白(Aβ)的沉積是AD的重要病因，可以通過(guò)多個(gè)環(huán)節(jié)在Alzheimer病中產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白(RTN)家族成員Nogo-A及其受體NgR也參與AD的病理過(guò)程。
　　 中醫(yī)藥對(duì)AD的防治具有多途徑和多靶點(diǎn)優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為老年性癡呆的病位在腦，與心、脾、腎等五臟功能失調(diào)、氣血精髓虧虛、氣血運(yùn)行失調(diào)及痰濁淤血阻滯腦竅有著密切關(guān)系

3、，性質(zhì)屬于本虛標(biāo)實(shí)?；静C(jī)是髓減腦消，神經(jīng)失用。其主要治則為補(bǔ)腎填精、理氣化痰和活血化瘀等。腦靈湯由何首烏、白參、紅景天等藥物配伍而成，具有補(bǔ)腎填精活血、益氣化痰開(kāi)竅的功效。本文探討腦靈湯對(duì)阿爾茨海默病(AD)模型大鼠行為學(xué)、海馬組織形態(tài)學(xué)及海馬神經(jīng)元Nogo-A蛋白和受體NgR表達(dá)的影響，揭示AD的部分發(fā)病機(jī)理和腦靈湯的作用機(jī)制，為指導(dǎo)臨床應(yīng)用和開(kāi)發(fā)新藥提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：選用純系SD大鼠(雄性)30只隨機(jī)分為

4、5組，每組6只，分別為正常組、假手術(shù)組、模型組、中藥(腦靈湯)組和西藥(鹽酸多奈哌齊)組。喂養(yǎng)1周后，采用聚集態(tài)Aβ1-42、在大鼠雙側(cè)海馬注射建立AD模型。造模后喂養(yǎng)3周，采用Y-迷宮和Morris水迷宮檢測(cè)其行為學(xué)變化。取大鼠腦組織作冰凍切片，行改良剛果紅染色檢測(cè)海馬內(nèi)Aβ的表達(dá)；HE染色觀察大鼠海馬組織形態(tài)學(xué)改變；用免疫組化法觀察Nogo-A蛋白及其受體(NgR)在大鼠海馬CA3區(qū)的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：1、Y-迷宮實(shí)驗(yàn)

5、：與正常組相比較，模型組大鼠躲避至安全區(qū)所需電擊次數(shù)最多，有顯著性差異(P<0.05)。與模型組相比較，西藥組和中藥組躲避至安全區(qū)所需電擊次數(shù)明顯減少，比較有顯著差異(P<0.05)。中藥組和西藥組者相比，無(wú)顯著性差異(P>0.05)。2、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)：①隱匿平臺(tái)搜索實(shí)驗(yàn)中，模型組逃避潛伏期最長(zhǎng)，與正常組比較有顯著性差異(P<0.05)；②探索實(shí)驗(yàn)中，正常組和假手術(shù)組大鼠的平均穿越次數(shù)最多，西藥組和中藥組大鼠的穿越次數(shù)又多于模

6、型組，比較有顯著性差異(P<0.05)。3、剛果紅染色：模型組、中藥組和西藥組均有Aβ的沉積，但中藥組和西藥組較模型組明顯減少(P<0.05)。正常組和假手術(shù)組未見(jiàn)Aβ的沉積。4、HE染色：正常組和假手術(shù)組海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊，無(wú)明顯神經(jīng)元丟失；與正常組及假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，錐體細(xì)胞排列稀疏、紊亂，錐體細(xì)胞數(shù)目明顯減少(P<0.05)；中藥組和西藥組較模型組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目相對(duì)增多，細(xì)胞排列較整

7、齊(P<0.05)。5、免疫組化：與正常組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬CA3區(qū)域Nogo-A陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多，NgR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最少，且中藥組和西藥組Nogo-A免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，但NgR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增多，比較有有顯著性差異(P<0.05)。
　　 結(jié)論：(1)本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明大鼠雙側(cè)海馬內(nèi)注射Aβ1-42后模型大鼠出現(xiàn)了學(xué)習(xí)記憶功能障礙及AD病理改變，說(shuō)明AD模型復(fù)制成功。(2)AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，腦靈湯可明顯