蝙蝠葛堿和蝙蝠葛蘇林堿對獲得性長QT綜合征的作用及機制研究.pdf

1、目的：蝙蝠葛堿（dauricine，Dau）和蝙蝠葛蘇林堿（daurisoline，DS）是從中藥蝙蝠葛（Menisperum dauricum，DC）根莖中提取的雙芐基異喹林類生物堿。本研究擬采用標準微電極技術和膜片鉗技術，以快速激活的延遲整流鉀電流（Ikr）阻斷劑多非利特（dofetilide，Dof）作為工具藥，模擬LQT2模型，研究Dau和DS對獲得性LQTS的作用，并在細胞和離子水平探討Dau和DS抗心律失常的作用機制。

2、>　　 方法：
　　 1. 采用腹主動脈縮窄法制備家兔心肌肥厚模型；采用標準微電極技術，記錄正常及肥厚家兔右心室乳頭肌動作電位，在正常以及細胞外低鉀情況下，研究Dau和DS對家兔乳頭肌APD和EADs的影響。
　　 2. 采用酶消化法分離家兔左心室單個心肌細胞；利用全細胞膜片鉗技術，在電流鉗制模式下記錄單個細胞動作電位，觀察Dau和DS對單個心肌細胞APD和EADs的影響。
　　 3. 采用酶消化法分離家兔左心

3、室單個心肌細胞，用膜片鉗技術，在電壓鉗制模式下記錄單個細胞L-型鈣電流（Ica-L），研究Dau和DS對心室肌細胞Ica-L動力學的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1. 蝙蝠葛堿和蝙蝠葛蘇林堿對家兔乳頭肌早后除極的影響
　　 (1)Dau：在正常家兔乳頭肌標本，未發(fā)生EADs。將正常臺氏液換成低鉀液并加入Dof后，與給藥前相比，50%動作電位時程（APD50）及90%APD（APD90）分別延長了77±6 ms和72

4、±7 ms，EADs發(fā)生率為16.7%（1/6）。心肌肥厚家兔乳頭肌標本在正常臺氏液中EADs發(fā)生率為33.3%（2/6）；將正常臺氏液換成低鉀液并加入Dof 1 μmol·L-1后，APD50和APD90分別延長了197±9 ms和249±14 ms，APD90-APD30的差值延長了122±5.4 ms，EADs發(fā)生率為66.7%（4/6）。EADs發(fā)生后，給予終濃度為30 μmol·L-1的Dau，作用10 min，發(fā)現(xiàn)Dau可縮

5、短APD，APD50和APD90分別縮短了100±8 ms和111±8 ms，APD90-APD30的差值縮短了79±14 ms；抑制EADs的發(fā)生，發(fā)生率為0%（0/4）（P<0.05）。
　　 (2)DS：在正常家兔乳頭肌標本，未發(fā)生EADs。將正常臺氏液換成低鉀液并加入Dof后，與給藥前相比，50%動作電位時程（APD50）及90%APD（APD90）分別延長了58±9 ms和92±3 ms，EADs發(fā)生率為16.7%（1

6、/6）。心肌肥厚家兔乳頭肌標本在正常臺氏液中EADs發(fā)生率為33.3%（2/6）；將正常臺氏液換成低鉀液并加入Dof 1 μmol·L-1后，APD50和APD90分別延長了174±20 ms和218±19 ms，APD90-APD30的差值延長了129±8.9 ms，EADs發(fā)生率為83.3%（5/6）。EADs發(fā)生后，給予終濃度為15 μmol·L-1的DS，作用10 min，發(fā)現(xiàn)DS可縮短APD，APD50和APD90分別縮短了9

7、5±10 ms和113±8 ms，APD90-APD30的差值縮短了56±3.8 ms；抑制EADs的發(fā)生，發(fā)生率為0%（0/5）（P<0.05）。
　　 2. 蝙蝠葛堿和蝙蝠葛蘇林堿對家兔單個心肌細胞早后除極的影響
　　 (1)Dau：在正常臺氏液中，未觀察到EADs，給予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分別延長了118±9.3 ms和145±13 ms，APD90-APD30的差值延長了73

8、±7.6 ms，EADs發(fā)生率為16.7（1/6）；在低鉀低鎂臺氏液中，EADs發(fā)生率為33.3%（2/6），給予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分別延長了145±13 ms和196±4.6 ms，APD90-APD30的差值延長了59±7.5 ms，EADs發(fā)生率為83.3%（5/6）。在低鉀、低鎂臺氏液中，給予Dof，誘發(fā)EADs后，給予終濃度分別為1，3，10 μmol·L-1的Dau發(fā)現(xiàn)，Dau能抑制E

9、ADs的發(fā)生（P<0.05），縮短APD（P<0.05），使APD90-APD30的差值縮短，分別為201±22 ms、187±32 ms和174±15 ms（P<0.05）。
　　 (2)DS：在正常臺氏液中，未觀察到EADs，給予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分別延長了91±7.9 ms和132±6.5 ms，APD90-APD30的差值延長了77±7.6 ms，EADs發(fā)生率為16.7（1/6）

10、；在低鉀、低鎂臺氏液中，EADs發(fā)生率為33.3%（2/6），給予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分別延長了95±2.3 ms和139±9.9 ms，APD90-APD30的差值延長了74±6.4 ms，EADs發(fā)生率為83.3%（5/6）。在低鉀、低鎂臺氏液中，給予Dof，誘發(fā)EADs后，給予終濃度分別為0.5，1.5，5 μmol·L-1的DS發(fā)現(xiàn)，DS抑制EADs的發(fā)生（P<0.05），縮短APD（P<0

11、.05），并可使APD90-APD30差值縮短，分別為243±12 ms、206±17 ms和184±12 ms（P<0.05）。
　　 3. 蝙蝠葛堿和蝙蝠葛蘇林堿對家兔單個心肌細胞L型鈣通道的影響
　　 (1)Dau：Dau 1，3，10 μmol·L-1組均可使Ica-L峰值電流減小。Control組和Dau各劑量組Ica-L分別為-1.8±0.3 Na、-1.3±0.3 Na、-1.1±0.2 Na和-1.0±0

12、.2 Na。與control組相比，Dau各劑量組差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對照組以及給藥后各組細胞最大激活電壓均為0 Mv，Dau使各測試電壓水平Ica-L減小，I-V曲線上移。Dau濃度為1，3，10 μmol·L-1時，半激活電壓（V1/2）分別從藥前的-20.9±1.5 Mv增至-16.4±0.6 Mv（P<0.05）、-20.8±1.6 Mv增至-15.6±1.7 Mv（P<0.05）和-20.5±1.4 Mv增至-

13、12.8±1.2 Mv（P<0.01）；激活曲線斜率κ值分別從藥前的2.2±0.5增至3.2±0.8、2.2±0.5增至3.2±0.1（P<0.05）和1.8±0.5增至3.7±0.2（P<0.05）；半失活電壓（V1/2）分別從藥前的-23.0±5.0 Mv減小至-27.7±4.0 Mv、-20.5±5.3 Mv減小至-25.6±4.3 Mv和-21.8±5.4 Mv減小至-32.3±2.5 Mv（P<0.05）；失活曲線斜率κ值分別

14、從藥前的-6.4±0.8減小至-8.1±1.0、-5.8±0.7減小至-7.7±1.2和-6.6±0.7減小至-10.2±1.6（P<0.05）；Ica-L恢復曲線的時間常數(shù)（τ）分別由給藥前的150±35 ms延長至216±36 ms、209±29 ms延長至327±61 ms（P<0.05）和275±16 ms延長至361±11 ms（P<0.05）。
　　 (2)DS：DS 0.5，1.5，5 μmol·L-1組均可使Ic

15、a-L峰值電流減小。Control組和DS各劑量組Ica-L分別為-1.6±0.4 Na、-1.1±0.1 Na、-1.0±0.2 Na和-0.9±0.1 Na。與control組相比，DS各劑量組差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對照組以及給藥后各組細胞最大激活電壓均為0 Mv，DS使各測試電壓水平Ica-L減小，I-V曲線上移。DS在1.5，5 μmol·L-1時，半激活電壓（V1/2）分別從藥前的-12.8±1.7 Mv增至-1

16、0.4±1.7 Mv和-12.8±1.3 Mv增至-9.7±1.1 Mv（P<0.05）；激活曲線斜率κ值分別從藥前的3.5±0.7增至5.1±0.8和5.0±0.6增至6.9±0.8（P<0.05）；半失活電壓（V1/2）分別從藥前的-23.5±2.0 Mv減小至-25.3±1.2 Mv（P<0.05）和-24.3±1.8 Mv減小至-27.8±3.4 Mv（P<0.05）；失活曲線斜率κ值分別從藥前的-5.6±0.7減小至-7.1±

17、0.9（P<0.05）和-5.9±0.8減小至-8.1±1.3（P<0.05）；Ica-L恢復曲線的時間常數(shù)（τ）分別由給藥前的245±49 ms延長至290±38 ms和222±60 ms延長至363±46 ms（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1. 在正常、低鉀低鎂以及心肌肥厚狀態(tài)下，Dau和DS能抑制Dof誘發(fā)的家兔乳頭肌和家兔單個心肌細胞EADs，縮短EAD發(fā)生后的APD50和APD90，并能縮短APD90