在大鼠E16-17原代神經(jīng)元中活動依賴性LTP對Dlx2表達調(diào)控的研究.pdf

1、目的：通過Kcl刺激誘導(dǎo)大鼠胚胎腦皮質(zhì)神經(jīng)元，觀察Dlx2在神經(jīng)元內(nèi)的分布，及不同時間點的表達與相關(guān)調(diào)控機制的變化，探討 Dlx2的表達變化特點、活動性依賴的信息通路調(diào)控變化，及其可能對腦皮質(zhì)神經(jīng)元在活動依賴性中的作用的機制。
　　方法：利用原代培養(yǎng)細胞技術(shù)獲得16-17d胎齡大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元，采用RT-PCR檢測Dlx2經(jīng)過Kcl刺激誘導(dǎo)后在不同時間點的表達變化情況；采用共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測神經(jīng)元形態(tài)變化及 Dlx2的表達分布。

2、
　　結(jié)果：激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示：以突觸素作為檢識，大腦皮層神經(jīng)元存活并生長良好，已初步建立了神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。RT-PCR顯示在轉(zhuǎn)錄水平，經(jīng)Kcl刺激誘導(dǎo)的各個基因表達情況：(1)Dlx2、Arx、Rb1、Ras、Raf、MEK、ERKl、ERK2、PI3K及 Akt的mRNA在不同時間點的神經(jīng)元標本中均有表達；(2)Dlx2隨著 Kcl的誘導(dǎo)表現(xiàn)出表達的一個變化，誘導(dǎo)6 h后，mRNA表達略有下降，在誘導(dǎo)的中晚期隨著刺激時間的延長

3、mRNA表達也持續(xù)增高，并在12 h達到表達的高峰；(3)Arx mRNA的表達早期出現(xiàn)顯著增高的趨勢，持續(xù)到12 h，但24 h表達量略有降低；(4)Rb1在0.5~6 h呈現(xiàn)遞增的趨勢，而在12 h mRNA表達明顯的降低，隨后在24 h又出現(xiàn)上升趨勢，并達到表達的高峰；(5)Ras mRNA于Kcl刺激誘導(dǎo)后30min處于表達抑制狀態(tài)，在3h表達快速增高，在刺激誘導(dǎo)6h、12h的中晚期表現(xiàn)為下降趨勢；(6)Raf mRNA在誘導(dǎo)后

4、的30 min處于表達抑制狀態(tài)，在誘導(dǎo)后3 h表達量增高，在隨后的6h、12h Raf表達下降；(7)在Kcl刺激誘導(dǎo)后30min，ERK1 mRNA表達抑制，3 h表達增高，在隨后6 h、12 h表達下降的趨勢；(8)在Kcl刺激誘導(dǎo)后30min，ERK2 mRNA表達有所下降，在誘導(dǎo)后3h表達增高，在隨后6h、12h的表達量持續(xù)下降；(9)在Kcl刺激誘導(dǎo)后30min，MEK mRNA表達量較正常對照組有所下降，在誘導(dǎo)后3h表達增高

5、，在隨后6h、12h的表達下降，并且12h的表達下降最明顯；(10)PI3K mRNA在Kcl刺激誘導(dǎo)后表現(xiàn)為30min表達抑制，3h表達增高，在隨后6h、12h表達下降；(11)Akt mRNA在Kcl刺激誘導(dǎo)后表現(xiàn)為30min表達量下降，3h表達量增高，在隨后6h、12h表達量下降；(12)在激光共聚焦顯微鏡下，經(jīng)過 Kcl刺激誘導(dǎo)的神經(jīng)元胞體明顯大于空白對照組。
　　結(jié)論：經(jīng)Kcl刺激后Dlx2 mRNA表達升高；Ras/R