補(bǔ)腎中藥干預(yù)雷公藤多苷對(duì)原代培養(yǎng)卵巢顆粒細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本研究以補(bǔ)腎中藥菟絲子黃酮及六味地黃丸作為干預(yù)手段,以體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞作為研究對(duì)象,運(yùn)用血清藥理學(xué)的方法,觀察補(bǔ)腎中藥干預(yù)雷公藤多苷(GTW)對(duì)原代培養(yǎng)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖、凋亡及分泌雌二醇的影響,從而探討雷公藤多苷對(duì)雌性生殖毒性的機(jī)制及補(bǔ)腎中藥的防護(hù)作用機(jī)理。為臨床安全有效的應(yīng)用雷公藤多苷提供科學(xué)參考依據(jù)。
　　方法:3周齡的SD雌性幼鼠皮下注射PMSG(孕馬血清促性腺激素),48小時(shí)后脫臼處死大鼠,獲取卵巢顆粒

2、細(xì)胞。取4周齡SD雌性幼鼠,采用血清藥理學(xué)的方法,分別制備雷公藤多苷組、雷公藤多苷加六味地黃丸組、雷公藤多苷加菟絲子黃酮組含藥血清,并設(shè)空白組。卵巢顆粒細(xì)胞,預(yù)培養(yǎng)后分別與四組血清在體外共同培養(yǎng),收集培養(yǎng)液,用MTT法檢測(cè)其作用12h、24h、48h時(shí)對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖的影響;用放射免疫方法檢測(cè)其作用12h、24h、48h時(shí)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的雌二醇(E2)分泌量;采用SP法檢測(cè)其作用24h時(shí)對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)。

3、r>　　結(jié)果:(1)放射免疫結(jié)果顯示,空白組與雷公藤多苷組分泌雌二醇比較,12h、24h無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),48h有極顯著性差異(P<0.01),12h、24h、48h中藥干預(yù)兩組均較雷公藤多苷組增加,黃酮組高于六味組,三個(gè)時(shí)點(diǎn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,黃酮組與雷公藤多苷組相比有顯著性差異(P<0.05),六味組均值較雷公藤多苷組升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著性差異(P>0.05);(2)OD值結(jié)果顯示,12h、24h、48h三個(gè)時(shí)點(diǎn)雷公藤多苷組O

4、D值最低,與空白組相比均有極顯著性差異(P<0.01);三個(gè)時(shí)點(diǎn)中藥干預(yù)各組OD均值較多苷組高,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析黃酮組、六味組與雷公藤多苷組相比都有極顯著意義(P<0.01);(3)SP法檢測(cè)Bcl-2蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,GTW組Bcl-2表達(dá)測(cè)值明顯少于空白組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有極顯著性差異(P<0.01),提示雷公藤多苷組抑制Bcl-2表達(dá)。黃酮組、六味組Bcl-2表達(dá)與雷公藤多苷組相比均有極顯著性差異(P<0.01),且黃酮組表達(dá)較六味組有所增

5、強(qiáng),兩組間統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:雷公藤多苷對(duì)體外培養(yǎng)的卵巢顆粒細(xì)胞具有一定的影響。表現(xiàn)在上清液雌二醇分泌減少,細(xì)胞增殖能力的下降、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。菟絲子黃酮和六味地黃丸能明顯促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖,有效的延緩了顆粒細(xì)胞的凋亡,從而對(duì)抗雷公藤多苷對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞增殖的抑制及促進(jìn)凋亡的作用。六味地黃丸對(duì)雷公藤多苷所致SD幼鼠生殖損傷的改善作用不明顯,菟絲子黃酮能明顯促進(jìn)雌二醇的分泌,從而干預(yù)實(shí)驗(yàn)性SD幼鼠雷公藤多苷