無核雪柑授粉受精及種胚敗育的研究.pdf

1、基于無核雪柑胚胎及其生物學(xué)特性的研究很少，且其無核、少核的性狀穩(wěn)定，具有一定的研究價值等特點，選取了無核雪柑作為研究材料。本項目從授粉受精生物學(xué)、種胚發(fā)育過程的石蠟切片、鏡檢觀察及蛋白質(zhì)的雙向電泳三個方面對無核雪柑與普通雪柑進行比較研究，旨在通過觀察無核雪柑胚胎敗育前后的形態(tài)變化，檢測此過程蛋白質(zhì)的差異，探討整個發(fā)育過程存在的特異蛋白，以明了無核雪柑的無核機理。 1無核雪柑與普通雪柑的授粉受精生物學(xué)研究了無核雪柑與普通雪柑兩個品

2、種花的形態(tài)特征、花粉離體培養(yǎng)的發(fā)芽率、授粉后花粉在柱頭的萌發(fā)情況等。結(jié)果表明其花粉均具有可育性，但離體培養(yǎng)的花粉及授粉后的發(fā)芽率存在較大差異。離體培養(yǎng)普通雪柑花粉發(fā)芽率為26.91％，無核雪柑花粉發(fā)芽率僅為9.33％；普通雪柑×普通雪柑組合授粉2d花粉在柱頭上的發(fā)芽最好，發(fā)芽率高達80％，花粉管長超過花粉粒徑的3～5倍；無核雪柑×無核雪柑組合花粉的發(fā)芽率僅為5％，且花粉管很短，無核雪柑×普通雪柑授粉組合居中。無核雪柑花粉雖然可育，但柱頭

3、的乳突結(jié)構(gòu)和花柱的花柱道不發(fā)達，自交不親和，坐果率低。不同授粉組合坐果率差異較大，普通雪柑×普通雪柑坐果率為1.91％，無核雪柑×無核雪柑和無核雪柑×普通雪柑2個組合坐果率分別為0.25％和0.38％。 2無核雪柑與普通雪柑種胚發(fā)育的解剖學(xué)研究對不同授粉組合的種胚進行石蠟切片觀察，選擇有代表性的進行拍照。結(jié)果表明，珠被、珠心、胚囊及珠心胚等組織不同時間存在不同程度的崩潰、瓦解及最終的消失，是導(dǎo)致無核雪柑無核、少核的一個重要原因。

4、普通雪柑×普通雪柑種胚發(fā)育比較正常，合子胚出現(xiàn)時期早于無核雪柑×普通雪柑組合，果實成熟時可育種子約占50％，胚數(shù)6.4個/果；無核雪柑×普通雪柑組合只能產(chǎn)生部分可育種子，約占7.5％，其胚比普通雪柑組合的小，但數(shù)量稍多，約7.3個/果；無核雪柑×無核雪柑胚胎完全敗育，不能產(chǎn)生正常種子。無核雪柑×普通雪柑合子胚出現(xiàn)時期較遲，故其成熟果實中正常種子也較小。 3無核雪柑與普通雪柑種胚發(fā)育過程蛋白質(zhì)的差異采用雙向電泳分析不同授粉組合種胚

5、不同發(fā)育時期蛋白質(zhì)的特異性，并用考馬斯亮藍G-250法測定其蛋白質(zhì)含量。結(jié)果表明：無核雪柑種胚早期的蛋白質(zhì)含量相對較高，授粉54d以后與普通雪柑的種胚蛋白質(zhì)相當(dāng)，少數(shù)蛋白質(zhì)在數(shù)量、分子量、等電點及時間上存在差異。無核雪柑不同發(fā)育階段蛋白質(zhì)組分相對穩(wěn)定，但有其發(fā)育階段特異性，出現(xiàn)了6個特異蛋白質(zhì)(P1～P6)，分別是P1(97.0kD，pI6.2)、P2(13.5kD，pI5.2)、P3(19.8kD，pI6.5)，P4(10.3kD，p

6、I4.8)，P5(12.5kD，pI5.9)及P6(38.6kD，pI5.7)；從無核雪柑與普通雪柑的對比中，發(fā)現(xiàn)了3個僅存在于無核雪柑胚胎中的特異蛋白質(zhì)P11～P13，P11(67.0kD，pI5.1)、P12(65.5kD，pI5.4)及P13(97.0kD，pI5.8)；另外，P14(64.3kD，pI5.9)在無核雪柑胚胎中表達量明顯大于普通雪柑，這4個蛋白質(zhì)在無核雪柑胚胎發(fā)育時期表達很穩(wěn)定，認(rèn)為這4個蛋白質(zhì)是與無核雪柑胚胎敗育