石斛杞片功效成分及緩解視疲勞功能試驗研究.pdf

1、近年來，人們患眼疾的情況已經(jīng)日趨嚴重，現(xiàn)代人長時間對著電視機和計算機，縮短了眼睛休息的時間；加上慢性病如糖尿病、高血壓，使視網(wǎng)膜病變、白內(nèi)障、青光眼等發(fā)病率大增。石斛杞片是以葉黃素，β-胡蘿卜素及原花青素為主要活性成分的保健品，本課題主要以主要活性成分來制定該產(chǎn)品的檢測方法，測定活性成分的含量并進行其安全性毒理實驗和緩解視疲勞功能研究。為石斛杞片進行質(zhì)量控制以及對其他緩解眼視疲勞片研究提供依據(jù)具有重要意義。本課題研究內(nèi)容主要包括兩大方面

2、：
　　一、石斛杞片活性成分含量測定研究
　　1、 HPLC對照品替代法同時測定石斛杞片中葉黃素和β-胡蘿卜素含量方法的研究
　　方法：60℃中超聲3 min水解，0.1％BHT的乙腈溶液超聲處理30 min，定容；色譜柱Thermo-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：A甲醇、B水和C四氫呋喃組成，梯度洗脫；流速1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長為474 nm。
　　結(jié)果：葉黃素平均含量

3、值為11.52mg/g，平均回收率為99.55%， RSD=2.47%；β-胡蘿卜素平均含量為3.49mg/g，平均回收率為98.92%，RS D=4.69%。本實驗首次用對照品替代法測定葉黃素和β-胡蘿卜素準(zhǔn)確性高，簡單方便，具有實際應(yīng)用價值，可以推廣使用。
　　2、 HPLC-M S檢測葉黃素以及分析葉黃素電離機理
　　方法：以乙腈為提取溶劑，超聲提取葉黃素；色譜柱Thermo Beta Basic-18(150 mm×

4、2.1 mm，5μm)；流動相：甲醇-0.8%甲酸水（95:5）；流速0.2mL/min；柱溫：30℃；離子源ESI(+)；掃描模式MS3；一級掃描采用源內(nèi)裂解全掃描；二三級掃描采用碎片離子掃描。
　　結(jié)果：實驗采用源內(nèi)裂解-全掃描模式，使葉黃素失去甲苯特征碎片離子，再對475.2[M-C7H8]+進行二級三級掃描，得到質(zhì)荷比為457.2、439.3、362.4的分子離子。首次采用源內(nèi)裂解后的分子離子作為二三級母離子，為葉黃素定性

5、提供新的思路和數(shù)據(jù)。
　　3、香草醛-鹽酸法測定石斛杞片中原花青素含量研究
　　方法：60%甲醇為提取液，40℃超聲提取45 min；加入6 ml4%香草醛甲醇溶液與3 mL濃鹽酸，避光反應(yīng)30 min，用甲醇作空白對照，在波長500 nm處測定吸光度。
　　結(jié)果：香草醛法測定原花青素含量為3.78%，平均回收率為98.8%，RSD為2.86%。
　　4、高效液相色譜法測定石斛杞片中原花青素含量
　　方法：

6、甲醇為提取液，超聲提取45min；色譜柱Ultimate ColumnTMC18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈-水（5:95，v/v）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：280 nm；進樣量：10μL。
　　結(jié)果：高效液相色譜法測定原花青素平均含量為38.1mg/g，平均回收率為98.9%， RSD為3.40%。
　　二、石斛杞片安全性實驗及緩解視疲勞功能試驗研究
　　1、石斛杞

7、片安全性實驗研究
　　方法：30天喂養(yǎng)實驗（觀察動物的一般形態(tài)、動物體重變化與食物利用率差異、大鼠血常規(guī)檢查結(jié)果、血清生化檢驗結(jié)果、對大鼠臟體比的影響、對大鼠臟體比的影響）；急性毒性實驗；Ames實驗；小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗；小鼠精子畸變試驗。
　　結(jié)果：說明該產(chǎn)品無毒性，無致突變性。
　　2、石斛杞片緩解視疲勞功能試驗研究
　　方法：120名志愿者采用隨機雙盲法分成對照組和樣品組，樣品組食用受試物，對照組