抗TCRαβ單克隆抗體對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎防治作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 DBA/1小鼠膠原性關(guān)節(jié)CIA模型的建立目的建立膠原誘發(fā)關(guān)節(jié)炎(IA)的DBA/1小鼠模型，對(duì)其發(fā)病特點(diǎn)、臨床特征及病理學(xué)變化分別予以分析，為相關(guān)藥物療效評(píng)價(jià)提供合適模型。 方法 1、將牛Ⅱ型膠原與等體積的完全弗氏佐劑充分乳化，在DBA/1小鼠尾根部2-3cm處皮內(nèi)注射100μl混合乳劑，3周后再重復(fù)注射等量乳劑。 2、觀測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)小鼠的癥狀表現(xiàn)，如發(fā)病率、腫脹程度、炎癥指數(shù)和體重等變化。 3

2、、對(duì)中晚期發(fā)病關(guān)節(jié)進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)和X線放射學(xué)檢查。 結(jié)果 1、在首次免疫后28d，膠原注射小鼠后足踝關(guān)節(jié)開(kāi)始出現(xiàn)明顯紅斑，腫脹，體重下降，行動(dòng)不便，39d腫脹厚度達(dá)到最高，隨后逐漸消退，53d后(即再次免疫后32d時(shí))到達(dá)較低值，呈時(shí)間依賴(lài)方式，嚴(yán)重的出現(xiàn)關(guān)節(jié)畸形，正常組無(wú)上述癥狀。 2、所有接種CⅡ和CFA的小鼠均發(fā)生了多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，CIA模型組小鼠的CIA發(fā)生率為100％。 3、病理學(xué)結(jié)果顯示，患

3、病關(guān)節(jié)表現(xiàn)為周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)、滑膜增生、軟骨和骨骼破壞等較為典型的RA變化；正常對(duì)照組小鼠均無(wú)上述表現(xiàn)。X線放射學(xué)檢查顯示關(guān)節(jié)面不光滑，軟組織明顯水腫。 結(jié)論 采用DBA/1小鼠，通過(guò)皮下注射Ⅱ型膠原乳劑可成功誘導(dǎo)CIA模型，而且發(fā)生率為100％，該模型在發(fā)病特點(diǎn)、組織病理學(xué)改變及X線放射學(xué)檢查等方面，較充分模擬了人類(lèi)RA的病變特征，適用于開(kāi)展RA防治藥物或其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究。 第二部分抗TCRαβ單克隆抗體對(duì)小鼠

4、膠原性關(guān)節(jié)炎的抑制作用 目的 通過(guò)膠原誘導(dǎo)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，從不同時(shí)間點(diǎn)的癥狀表現(xiàn)、發(fā)病特點(diǎn)及病理學(xué)角度，研究抗TCRαβ單克隆抗體對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療作用，探討抗TCR αβ單克隆抗體防治類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的可行性和機(jī)制，對(duì)其藥理作用和機(jī)制作初步探討。 方法 選用DBA/1小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，尾根部皮內(nèi)注射牛Ⅱ型膠原與完全弗氏佐劑混合劑建立CIA關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，分別使用抗TCRαβ單克隆抗體和地塞米松給藥進(jìn)

5、行治療。通過(guò)臨床指標(biāo)和病理學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果等比較觀察各組對(duì)膠原誘導(dǎo)的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型的影響。 結(jié)果 抗TCRαβ單克隆抗體組對(duì)膠原性關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)腫脹具有抑制作用，明顯改善小鼠的全身癥狀。與CIA模型組比較，經(jīng)過(guò)單克隆抗體給藥，可顯著降低炎癥指數(shù)和腫脹厚度，體重變化趨勢(shì)不大，P<0.05為顯著性水平，單克隆抗體組相對(duì)地塞米松組發(fā)病緩慢，癥狀減輕。病理學(xué)方面其作用明顯，滑膜組織充血水腫明顯改善，明顯抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和血管翳形成。

6、 結(jié)論 膠原性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型是廣泛用于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的研究和針對(duì)治療靶點(diǎn)公認(rèn)的動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明抗TCRαβ單克隆抗體對(duì)小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎CIA模型有明顯抑制作用，抗炎作用良好。對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的防治具有積極意義。 第三部分抗TCRαβ單克隆抗體治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的機(jī)制探討 目的 建立類(lèi)似類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生機(jī)制的DBA/1小鼠Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的動(dòng)物模型，觀察抗TCRαβ單克隆抗體對(duì)Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的小鼠

7、關(guān)節(jié)炎模型的治療中血清IFN-γ、TNF-α和IL-4細(xì)胞因子表達(dá)的影響，從免疫學(xué)角度，探討TCRαβ單克隆抗體防治類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的可能作用機(jī)制。 方法 以Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的小鼠關(guān)節(jié)炎作為模型，單克隆抗體、地塞米松腹腔內(nèi)注射治療CIA模型。通過(guò)Luminex200液晶芯片分析平臺(tái)鑒定微球的顏色來(lái)確定反應(yīng)類(lèi)型，而對(duì)反應(yīng)的定量分析，測(cè)定血清細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的含量。 結(jié)果 Luminex200檢測(cè)結(jié)果

8、顯示：與正常對(duì)照組比較，CIA小鼠血清中TNF-α、IFN-γ水平有顯著性差異，抗TCR αβ單抗組能抑制CIA小鼠血清TNF-α、IFN-γ水平，表明炎性因子在CIA過(guò)程中的變化。 結(jié)論 細(xì)胞因子參與了Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)炎癥過(guò)程，在單克隆抗體防治作用中扮演重要角色?？筎CR αβ單克隆抗體有明顯的治療作用，機(jī)理包括影響關(guān)節(jié)局部細(xì)胞因子，其機(jī)制可能與降低炎性因子的表達(dá)，調(diào)節(jié)異常免疫功能有關(guān)，減輕炎癥損傷，對(duì)類(lèi)