P物質(zhì)納米緩釋系統(tǒng)的建立及其生物學(xué)作用的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、正畸牙周組織的改建離不開神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，神經(jīng)肽與正畸牙周組織改建的關(guān)系十分密切。已經(jīng)證實(shí)主要是神經(jīng)肽SP、CGRP等參與了牙周組織的改建，尤其是牙槽骨的改建。作為多肽類物質(zhì)，神經(jīng)肽類物質(zhì)很容易被酶消化降解，在機(jī)體內(nèi)半衰期僅幾分鐘，這就很難使其長時(shí)間發(fā)揮生理效用。為了能較長時(shí)間的研究觀察其作用，建立一種緩釋載藥系統(tǒng)很有必要。本研究旨在建立一種P物質(zhì)納米緩釋系統(tǒng)，使能夠持續(xù)緩慢釋放P物質(zhì)，延長其作用時(shí)間，并將其用于細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中

2、，較長時(shí)間的觀察研究神經(jīng)肽P物質(zhì)對牙周膜細(xì)胞以及在牙槽骨改建中的作用，以期有助于進(jìn)一步闡明神經(jīng)肽在正畸牙周改建中的神經(jīng)調(diào)控機(jī)理。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 1P物質(zhì)PLGA納米緩釋微粒(SP-PLGANP)的制備及其性質(zhì)測定以PLGA為載體，應(yīng)用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備P物質(zhì)緩釋納米微粒，掃描電鏡考察其形態(tài)和大小，并運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定其載藥率、包封率及體外釋藥特性。結(jié)果顯示：在電鏡下，該納米球表面光滑圓整，球體均勻度

3、好，粒徑分布較均勻，平均粒徑114.56±21.42nm。SP-PLGA納米微粒的載藥率和包封率分別為32.08×10-3(g/g)、66.28％，累計(jì)釋放率相對時(shí)間的釋藥曲線圖顯示：P物質(zhì)納米粒體外能夠持續(xù)釋藥，具有緩釋效果。結(jié)果說明：建立了較好的P物質(zhì)PLGA納米緩釋微粒粉制備工藝，載藥納米微粒體外具有明顯緩釋特性。 2SP-PLGANP對體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞增殖作用的影響 將SP-PLGANP加入人牙周膜細(xì)胞的培養(yǎng)

4、液中，運(yùn)用四甲基偶氮挫鹽微量反應(yīng)比色法(MTT)測定細(xì)胞增殖情況。MTT顯示：培養(yǎng)1天時(shí)，各組吸光度值(OD)差異均無顯著性；3天時(shí)，P物質(zhì)組＞緩釋納米粒組＞空白組；5天時(shí)緩釋納米粒組＞P物質(zhì)組＞空白組；培養(yǎng)7天時(shí)結(jié)果與培養(yǎng)5天結(jié)果相同，繼續(xù)表現(xiàn)為緩釋納米粒組OD值最高。結(jié)果提示：我們制備的納米粒中P物質(zhì)生物活性保存良好，能持續(xù)釋放P物質(zhì)，能夠較長時(shí)間促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖。 3SP-PLGANP對大鼠磨牙正畸加力后牙周壓力側(cè)破骨細(xì)

5、胞數(shù)目的影響 本試驗(yàn)在給大鼠正畸加力后立即將SP-PLGANP注射入大鼠第一磨牙根尖水平牙齦下，分別在加力后1，3，7，14天后取材制作HE切片觀察組織變化和牙周壓力側(cè)破骨細(xì)胞數(shù)目，并和單純用P物質(zhì)以及空白對照組比較，以進(jìn)一步揭示P物質(zhì)對正畸牙周改建的作用。組織切片顯示：加力后一天，三組間牙周都未發(fā)現(xiàn)有破骨細(xì)胞；加后3天，破骨細(xì)胞數(shù)量表現(xiàn)為P物質(zhì)組＞緩釋納米粒組＞對照組；加力后7天，表現(xiàn)為緩釋納米粒組＞P物質(zhì)組次＞對照組；加力1