基于生物藥劑學研究四逆湯中附子與甘草合煎減毒增效機制.pdf

1、四逆湯是源于《傷寒論》的經典方，由附子、甘草（炙）、干姜組成，是回陽救逆的代表方，現代臨床與研究表明四逆湯對缺血再灌注的心肌損傷具有顯著的保護作用。附子與甘草合煎屬中藥湯劑基本要求之一，通過中藥復方合煎達到減毒增效的目的。
　　目的:
　　遵循中醫(yī)藥整體觀、辯證觀相適宜的整體性、系統(tǒng)性思想，本論文提出四逆湯中附子與甘草合煎達到減毒增效是多成分作用機體，機體產生相應應答而實現減毒增效的觀點?；谏锼巹W理論，結合LC-MS、

2、GC-MS等分析技術與代謝組學的分析手段，聯合“毒（效）性物質組-減毒-增效物質組-增效”體內體外相應整體代謝特征的研究模式，對四逆湯中附子與甘草合煎減毒增效機制進行研究。旨在系統(tǒng)探尋四逆湯中附子與甘草合煎達到減毒增效的物質基礎和作用機制，以期為整體、系統(tǒng)地研究中藥復方合煎配制理論提供新思路。
　　方法與結果:
　　1.四逆湯制備工藝和質量標準研究：以甘草酸、3種雙酯型生物堿（新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿）、6-姜辣素的含量、

3、干膏量為指標，對比分析傳統(tǒng)煎煮工藝與《中國藥典》制備方法的差異，結果表明傳統(tǒng)制備方法較藥典制備方法為優(yōu)。以3種單酯型生物堿（苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿）的含量之和、甘草酸的含量及干膏收率為化學指標，以小鼠的抗腦缺氧能力（喘氣次數和喘息時間）為藥效指標，首先采用L9（34）正交設計試驗優(yōu)選四逆湯的制備工藝；再運用MATLAB建立的前饋型人工神經網絡模型進一步優(yōu)化工藝參數，并進行驗證試驗。確定最佳制備工藝參數為：加8

4、倍量水，提取3次，每次提取1.5 h。四逆湯質量標準研究中，采用薄層色譜法對甘草、干姜兩味藥材進行鑒別，采用HPLC對3種單酯型生物堿及甘草酸進行含量測定，制定本品提取液（0.8 g·mL-1）每1 mL含3種單酯型生物總量不得少于25.00μg、甘草酸不得少于8.00 mg。
　　2.四逆湯（缺甘草與否）雙酯型生物堿含量變化及次烏頭堿藥代動力學研究：建立LC-MS測定四逆湯與缺甘草四逆湯（附子和干姜）中3種雙酯型生物堿的方法，并

5、對次烏頭堿大鼠體內吸收過程影響的對比研究。結果表明四逆湯樣品中3種雙酯型生物堿含量明顯低于缺甘草四逆湯樣品的3種雙酯型生物堿含量，且存在顯著性差異（p＜0.01）；四逆湯與缺甘草四逆湯相比次烏頭堿的體內吸收速率減慢，吸收總量卻增加。
　　3.四逆湯（缺甘草與否）對MI-RI大鼠心肌細胞代謝組學研究：建立了體外H9c2心肌細胞 MI-RI模型，研究四逆湯（缺甘草與否）對模型損傷細胞的毒-效作用，并采用GC-MS聯用技術對細胞培養(yǎng)液進

6、行代謝組學研究。結果表明，與缺甘草四逆湯相比，四逆湯對MI-RI模型對H9c2心肌細胞的損傷保護作用更強；四逆湯中附子與甘草合煎減毒增效機制與糖酵解、脂質代謝、三羧酸循環(huán)和氨基酸代謝中的氮的代謝等生物代謝途徑有關。
　　4.四逆湯（缺甘草與否）血漿組分 GC-MS代謝指紋分析及代謝組學研究：采用GC-MS技術建立大鼠血漿的代謝指紋譜，并進行代謝組學研究，從整體代謝調控模式證實四逆湯中附子與甘草合煎減毒增效的機制與糖酵解、脂質代謝、