日本血吸蟲及其它生命物質(zhì)的壓電免疫傳感技術(shù)研究.pdf

1、湖南大學(xué)博士學(xué)位論文日本血吸蟲及其它生命物質(zhì)的壓電免疫傳感技術(shù)研究姓名：吳朝陽(yáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：沈國(guó)勵(lì)俞汝勤2000.6.1湖南大學(xué)分析化學(xué)專業(yè)博士學(xué)位論文吳朝陽(yáng)2000年6月第=部分：提出了兩種基于正丁胺等離子體聚合膜(BAPPF)抗體的可逆固定化方法。一種方法是，基于BAPPF上帶有少量的正電荷，在膜上先自組一聚電解質(zhì)層，靜電吸附固定羊抗人IgG抗體于BA—PPF上。該傳感器可在070。126og／ml范圍測(cè)

2、試正常人血清IgO。另一方法是，在BAPPF上修飾可與金屬離子螯合的氨三乙酸基團(tuán)，用金屬離子活化后，修飾了二乙三胺五乙酸基團(tuán)的抗體蛋白質(zhì)分子即可螯合固定于BAPPF上。該傳感器可在036～126gg／ml范圍對(duì)正常人血清IgG進(jìn)行測(cè)定。上述方法克服了等離子體聚合膜上共價(jià)固定抗體使傳感器不能多次使用的缺點(diǎn)，可望成為普適的蛋白質(zhì)固定化方法。第三部分：提出了兩種直接質(zhì)量放大的免疫傳感技術(shù)。一種是，在測(cè)試溶液中加入一定量的抗體，待測(cè)抗原以抗原抗

3、體復(fù)合多層的方式結(jié)合到石英晶體表面，提高晶體表面單位面積上的質(zhì)量變化，從而提高傳感器的靈敏度。用該方法測(cè)試了人血清IgM，靈敏度為5301Hz／(ggml“)，檢測(cè)下限為102pg／ml。另一方法是，在測(cè)試溶液中加入蛋白A修飾的褐藻酸，IgG分子通過(guò)Fv端與固定抗原反應(yīng)時(shí)，其Fc端可與溶液中蛋白A結(jié)合，從而增大免疫反應(yīng)引起的質(zhì)量變化。傳感器的頻率響應(yīng)與日本血吸蟲感染兔血清抗體IgG在028—8599／ml范圍存在良好的線性關(guān)系。與常規(guī)的

4、壓電免疫分析比較，這兩種質(zhì)量放大方法的靈敏度和檢測(cè)下限均有較大提高。第四部分：提出了一種基于聚乙二醇(PEG)凝集的壓電免疫分析技術(shù)(PEGPI)。將壓電石英晶體插于抗原(抗體)與PEG的復(fù)合物溶液中，直接響應(yīng)待測(cè)抗體(抗原)免疫凝集反應(yīng)引起的溶液粘度、密度、介電常數(shù)以及晶體表面吸附量的變化。該方法無(wú)需抗原(抗體)的固定，方法簡(jiǎn)單、快速，整個(gè)測(cè)試過(guò)程只需幾分鐘或十幾分鐘即可完成。探討了這種PEGPI的響應(yīng)機(jī)理，并初步應(yīng)用于日本血吸蟲抗體