基因工程抗體Anti-HBsAg Fab非特異組合層析純化工藝初步研究.pdf

1、目的： 尋找一套適合重組基因工程抗體Anti-HBsAgFab的分離純化路線，為Anti-HBsAgFab后期產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定理論基礎(chǔ)。 方法： 1.選擇和驗(yàn)證陽離子交換介質(zhì)(StreamlineSP)從大腸桿菌中初步分離純化Anti-HBsAgFab最適吸附條件：利用試管法分別測(cè)定平衡緩沖液在不同pH和不同離子強(qiáng)度下陽離子交換介質(zhì)StreamlineSP對(duì)預(yù)分離純化蛋白的吸附效果，分別用1mlSP預(yù)裝柱及自裝28

2、mlStreamlineSP柱進(jìn)行離子交換層析以驗(yàn)證吸附效果。 2.選擇及驗(yàn)證疏水作用層析初步純化Anti-HBsAgFab的適宜條件：利用1ml疏水介質(zhì)預(yù)裝柱試劑盒選擇純化Anti-HBsAgFab的最佳疏水介質(zhì)，確定疏水介質(zhì)之后，利用1mlPhenylSepharosehighsub疏水預(yù)裝柱選擇疏水作用層析的適宜純化條件，最后，在小試規(guī)模的水平上驗(yàn)證疏水作用層析分離純化Anti-HBsAgFab的可行性。 3.小試

3、規(guī)模非特異組合層析分離純化基因工程抗體Anti-HBsAgFab初步嘗試：按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的擴(kuò)張柱床陽離子吸附層析——疏水作用層析——凝膠過濾層析非特異組合層析性純化工藝路線分離純化Anti-HBsAgFab。 結(jié)果： 1.用陽離子交換介質(zhì)(StreamlineSP)從大腸桿菌中初步分離純化Anti-HBsAgFab的適宜緩沖液體系為NaAc-HAc，適宜pH為4.4、適宜離子強(qiáng)度為100mmol/L～600mmol/L，在此

4、條件下陽離子交換介質(zhì)StreamlineSP與目的蛋白的吸附達(dá)到最佳效果，1mlSP預(yù)裝柱及自裝28mlSP柱進(jìn)行離子交換層析，均驗(yàn)證了這一吸附效果。 2.疏水作用層析純化Anti-HBsAgFab的最佳疏水介質(zhì)是PhenylSepharosehihgsub，適宜的平衡緩沖液為pH4.40.1mol/LNaAc-HAc+2mol/L(NH4)2SO4，洗脫緩沖液為pH4.40.1mol/LNaAc-HAc。1mlPhenylSe

5、pharosehihgsub疏水預(yù)裝柱驗(yàn)證了疏水作用層析純化條件的可行性，但小試規(guī)模疏水作用層析分離純化Anti-HBsAgFab結(jié)果不夠理想。 3.擴(kuò)張柱床陽離子吸附層析，目的產(chǎn)物的濃縮倍數(shù)大于10倍，總回收率大于85％，分離純化時(shí)間僅為120min。經(jīng)第二步疏水作用層析純化后，目的產(chǎn)物回收率達(dá)85％、純度大于70％。經(jīng)第三步凝膠過濾層析后，終產(chǎn)品的回收率為70％，純度為80％，目的蛋白的終產(chǎn)品含量為1.2mg/ml。

6、 結(jié)論： 1.試管法選擇的離子交換層析的最適吸附條件用于從大腸桿菌中初步分離純化Anti-HBsAgFab切實(shí)可行。 2.疏水作用層析分離純化Anti-HBsAgFab所篩選的條件是正確的，疏水作用層析適合Anti-HBsAgFab的分離純化，雖然最終的分離純化結(jié)果不理想，但這并不是由于分離純化方法選擇不正確所造成的。 3.非特異組合層析純化工藝路線是適合Anti-HBsAgFab的分離純化的，雖然目的產(chǎn)物的回收