右美托咪定對內(nèi)毒素性休克大鼠腦保護作用及機制研究.pdf

1、目的:觀察右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)對內(nèi)毒素性休克大鼠腦的保護作用，并探討其可能機制。
　　方法:SD大鼠56只，隨機分為4組，每組14只:生理鹽水(NS)組(NS0.5ml/kg+NS0.5 ml/kg)、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)模型組(NS0.5 ml/kg+LPS5mg/kg)、Dex低劑量組(Dex0.5μ g/kg+ LPS5mg/kg)和Dex高劑量組(Dex4.

2、5μ g/kg+LPS5mg/kg)。大鼠實驗前12小時禁食不禁水，分別將大鼠稱重，Dex低、高劑量組給予Dex0.5μg/kg和4.5μ g/kg，10min內(nèi)尾靜脈推注完畢，NS組和LPS模型組給予尾靜脈推注NS0.5 ml/kg。間隔5min后，NS組尾靜脈注射NS0.5 ml/kg，其余各組大鼠均給予LPS5 mg/kg（溶于NS，0.5 ml）尾靜脈緩慢注射(10 min)。6h后腹腔內(nèi)注射1％戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻

3、醉，采腦脊液和血液后立即處死大鼠，取腦進行實驗觀察。取每組中7只大鼠腦第五段，通過免疫組織化學方法顯示大鼠海馬結(jié)構(gòu)（海馬和齒狀回）的nNOS及c-fos陽性細胞表達，剩余的腦組織制備成10％勻漿，收集上清液。ELISA法檢測腦組織、腦脊液和血清TNF-α和IL-1β，Griess Reagent法檢測NO含量。每組另7只大鼠的腦分為左、右兩部分，取左側(cè)腦的海馬結(jié)構(gòu)采用RT--PCR法表達nNOSmRNA，取右側(cè)腦的海馬結(jié)構(gòu)采用Weste

4、rn blot法表達nNOS蛋白，剩余的腦組織稱濕重后置于80℃干燥箱內(nèi)，72h后稱干重，進行腦含水量的測定。
　　結(jié)果:
　　(1)與NS組相比，LPS模型組大鼠腦含水量明顯增高(P＜0.01);與LPS組相比，高、低劑量Dex組大鼠腦含水量明顯降低，具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。說明Dex具有減輕內(nèi)毒素性休克大鼠腦水腫的作用。
　　(2)與NS組相比，LPS模型組腦組織、腦脊液及血清TNF-α、

5、IL-1β炎性因子及NO含量明顯升高，具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與LPS模型組相比，Dex高劑量組能明顯減少腦組織、腦脊液及血清TNF-α、IL-1β及NO含量，具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，Dex低劑量組除了對血清的NO和腦脊液IL-1β、NO無明顯改變外，其它均有降低作用（P＜0.05或P＜0.01）。與低劑量組相比，Dex高劑量組大鼠腦脊液NO水平具有顯著的下降(P＜0.01)。
　　(3)免疫

6、組織化學方法和圖像分析技術(shù)研究結(jié)果顯示:NS組大鼠海馬CA1區(qū)、CA2區(qū)、CA3區(qū)及齒狀回(DG)均有nNOS和c-fos陽性細胞表達，但c-fos陽性細胞表達較弱;與NS組相比，LPS模型組大鼠海馬CA1區(qū)、CA2區(qū)、CA3區(qū)及DG內(nèi)nNOS和c-fos陽性細胞表達均增強(P＜0.01);與LPS模型組相比，Dex高、低劑量組CA1區(qū)、CA2區(qū)、CA3區(qū)及DG內(nèi)nNOS陽性細胞表達均降低(P＜0.05或P＜0.01);與LPS模型組相

7、比，Dex高劑量組CA1區(qū)、CA2區(qū)、CA3區(qū)及DG內(nèi)c-fos陽性細胞表達均降低(P＜0.05或P＜0.01)，Dex低劑量組可下調(diào)CA2區(qū)、CA3區(qū)及DG內(nèi)c-fos陽性細胞表達(P＜0.05或P＜0.01)。與Dex低劑量組相比，Dex高劑量組對CA1區(qū)、CA2區(qū)、CA3區(qū)和DG內(nèi)c-fos及CA3區(qū)nNOS陽性細胞表達的下調(diào)作用更為顯著(P＜0.05或P＜0.01)。
　　(4) RT-PCR法觀察海馬結(jié)構(gòu)nNOSmRNA

8、表達，與NS組相比，LPS組海馬結(jié)構(gòu)nNOSmRNA表達明顯升高(P＜0.05); Dex高、低劑量組能下調(diào)海馬結(jié)構(gòu)nNOSmRNA的表達(P＜0.05)。
　　(5) Western blot法觀察海馬結(jié)構(gòu)nNOS蛋白表達，與NS組相比，LPS組海馬結(jié)構(gòu)nNOS蛋白表達明顯升高(P＜0.05); Dex高、低劑量組能下調(diào)海馬結(jié)構(gòu)nNOS蛋白的表達(P＜0.05)。
　　結(jié)論:LPS上調(diào)海馬結(jié)構(gòu)的nNOSmRNA，增加nNO